目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對(duì)體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞有抑制膠原合成作用，擬進(jìn)一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對(duì)裸鼠移植模型體內(nèi)的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級(jí)BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術(shù)患者自愿捐贈(zèng)的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內(nèi)側(cè)皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據(jù)處理方法不同，隨機(jī)分成3 組，于瘢痕移植2 周根據(jù)分組行經(jīng)皮穿刺瘢痕內(nèi)注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質(zhì)體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質(zhì)體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實(shí)驗(yàn)取材。注射后2、4、6 周，對(duì)存活裸鼠進(jìn)行瘢痕硬度測(cè)量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學(xué)觀察以及透射電鏡觀察；提取細(xì)胞總RNA 后行RT-PCR 測(cè)定Col Ⅰ A1 mRNA 相對(duì)含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結(jié)果 注射后6 周內(nèi)17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，納入實(shí)驗(yàn)；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；4、6 周時(shí)A 組與B、C 組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。隨時(shí)間延長(zhǎng)，組織學(xué)觀察示3 組Ⅲ型膠原表達(dá)上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規(guī)則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細(xì)胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規(guī)則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；6 周時(shí)A 組與B、C 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內(nèi)注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達(dá)，促進(jìn)瘢痕組織成熟、軟化，脂質(zhì)體可促進(jìn)該抑制效果。
引用本文： 袁即山,利天增,祁少海. 人Ⅰ型前膠原基因反義寡核苷酸對(duì)人增生性瘢痕裸鼠移植模型膠原合成的作用. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(6): 718-723. doi: 復(fù)制