目的 脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是組織工程種子細(xì)胞的重要來源之一。探討低溫保存對hADSCs 體外生長特性及成骨分化潛能的影響，驗證凍存后的ADSCs 作為組織工程骨種子細(xì)胞的可行性。 方法 取自愿捐獻(xiàn)的經(jīng)脂肪抽吸術(shù)獲取人脂肪組織，采用膠原酶消化法分離hADSCs。取第2 代hADSCs 置于— 196℃液氮保存4 周后，37℃復(fù)蘇并測定細(xì)胞存活率。實驗分為兩組，實驗組為低溫保存的hADSCs，對照組為未經(jīng)低溫保存的hADSCs；均用成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)。采用DNA 定量（Hoechst33258 熒光比色法）測定細(xì)胞體外增殖活性，ALP 染色及茜素紅染色法測定ALP 活性和Ca2+ 含量，觀察低溫凍存對細(xì)胞成骨能力的影響。 結(jié)果 低溫凍存復(fù)蘇后的hADSCs 存活率為90.44% ± 2.62%。兩組細(xì)胞數(shù)量隨成骨誘導(dǎo)時間延長不斷增加，7 d 達(dá)平臺期；ALP 表達(dá)活性也不斷增加，于成骨誘導(dǎo)11 d 達(dá)平臺期，且2 周時ALP 染色均呈陽性；成骨誘導(dǎo)3 周時兩組茜素紅染色均呈強陽性反應(yīng)。兩組各時間點細(xì)胞數(shù)量、ALP 活性和Ca2+ 含量比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 低溫保存的hADSCs 體外生長及成骨能力未發(fā)生顯著變化，可以作為組織工程骨的種子細(xì)胞。
引用本文： 劉廣鵬,李宇琳,孫劍,周恒,崔磊. 低溫凍存對人脂肪來源干細(xì)胞成骨能力影響的實驗研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(10): 1224-1227. doi: 復(fù)制
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