目的 探討大鼠成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)液對同種大鼠BMSCs 的成骨誘導(dǎo)分化作用，為骨組織工程種子細(xì)胞的獲得尋找一種新方法。 方法 健康1 周齡SD 大鼠10 只，雌雄不限，體重20 ～ 30 g，采用貼壁法和酶消化法分別獲得BMSCs 和成骨細(xì)胞，并進(jìn)行鑒定。無菌條件收集第1 ～ 5 代成骨細(xì)胞培養(yǎng)液上清，與完全培養(yǎng)基1 ∶ 1 混合，制備成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)液，與第2 代BMSCs 共培養(yǎng)為誘導(dǎo)組，相同代次BMSCs 與完全培養(yǎng)液共培養(yǎng)為對照組。倒置相差顯微鏡下觀察共培養(yǎng)后BMSCs 形態(tài)變化，MTT 法檢測BMSCs 生長情況，免疫組織化學(xué)染色檢測共培養(yǎng)后BMSCs 的ALP、Col Ⅰ、骨鈣素（osteocalcin，OCN）蛋白的表達(dá)，采用 RT-PCR 檢測Col Ⅰ、OCN mRNA 的表達(dá)。 結(jié)果 誘導(dǎo)組共培養(yǎng)7 d BMSCs 體積變大，細(xì)胞由長梭形展開為扁平形和多邊形，并帶有突起；9 d 細(xì)胞呈集落狀生長。細(xì)胞生長曲線示BMSCs 數(shù)量隨培養(yǎng)時間延長而增加，對照組增殖能力較誘導(dǎo)組強；誘導(dǎo)培養(yǎng)4 ～ 7 d，對照組細(xì)胞數(shù)量與誘導(dǎo)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。誘導(dǎo)組培養(yǎng)12 d，ALP 染色呈陽性表達(dá)；18 d 出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié)；21 d Col Ⅰ和OCN 呈陽性表達(dá)；對照組均呈陰性表達(dá)。RT-PCR 檢測示誘導(dǎo)組培養(yǎng)21 d 有Col Ⅰ、OCN mRNA 表達(dá)，對照組未見表達(dá)。 結(jié)論 體外大鼠成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)液有明顯的誘導(dǎo)同種大鼠BMSCs 向成骨樣細(xì)胞分化的作用。
引用本文： 周昆鵬,陳曉禾,常麗,李秀群,李馴虎,張玨,鄧力. 成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)液對BMSCs 誘導(dǎo)分化作用研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(2): 145-150. doi: 復(fù)制