目的 利用重組腺病毒載體將生長分化因子5（growth and differentiation factor 5，GDF-5）基因?qū)雋BMSCs，研究GDF-5 基因的表達(dá)和對hBMSCs 成骨分化的影響。 方法 將重組腺病毒GDF-5（adenovirus GDF-5，Ad-GDF-5） [ 含綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標(biāo)記] 和空載腺病毒Ad-GFP 進(jìn)行擴(kuò)增并測定滴度，并以不同滴度兩種病毒感染第3 代hBMSCs，干預(yù)后2 d 熒光顯微鏡下觀察GFP 表達(dá)情況，RT-PCR 檢測GDF-5 在hBMSCs中的表達(dá)。取第3 代貼壁hBMSCs 隨機(jī)分為4 組：實(shí)驗(yàn)組（GDF-5 基因轉(zhuǎn)染組）、成骨誘導(dǎo)組、空載組和對照組。于干預(yù)后不同時間行倒置相差顯微鏡觀察、熒光顯微鏡觀察、熒光定量RT-PCR、免疫熒光染色和von Kossa 染色檢測細(xì)胞分化情況。 結(jié)果 Ad-GDF-5 滴度為1.0 × 109 pfu/mL，Ad-GFP 滴度為1.2 × 109 pfu/mL。Ad-GDF-5 及Ad-GFP 均能對hBMSCs 有效感染，并使其表達(dá)目的基因和GFP 基因。干預(yù)后1 ～ 7 d 實(shí)驗(yàn)組和成骨誘導(dǎo)組hBMSCs 細(xì)胞形態(tài)及生長方式向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化，而對照組和空載組hBMSCs 仍保持原有形態(tài)及生長方式。熒光定量RT-PCR 檢測示，干預(yù)后4 d 實(shí)驗(yàn)組GDF-5 基因表達(dá)明顯高于其余各組（P lt; 0.05）；實(shí)驗(yàn)組和成骨誘導(dǎo)組ALP、Col Ⅰ、骨鈣素基因表達(dá)均高于空載組和對照組（P lt; 0.05），成骨誘導(dǎo)組Col Ⅰ基因表達(dá)高于實(shí)驗(yàn)組（P lt; 0.05）。干預(yù)后4 d，免疫熒光染色示成骨誘導(dǎo)組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞表達(dá)并分泌Col Ⅰ，空載組和對照組細(xì)胞未見Col Ⅰ表達(dá)。干預(yù)后10 d，成骨誘導(dǎo)組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞von Kossa 染色為陽性，對照組和空載組為陰性。 結(jié)論 GDF-5 基因可通過腺病毒載體導(dǎo)入hBMSCs 穩(wěn)定表達(dá)，并促使其成骨分化，為進(jìn)一步研究這種轉(zhuǎn)基因hBMSCs 修復(fù)骨組織奠定了基礎(chǔ)。
引用本文： 程相俊,劉浩,張霆,黃巧蓉. 腺病毒介導(dǎo)的生長分化因子5 基因?qū)BMSCs 成骨分化的影響. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(8): 985-990. doi: 復(fù)制