檢測人腰椎間盤組織中的細胞密度、細胞凋亡率以及Bax 和半胱氨酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)的表達,為深入了解人腰椎間盤退變的機制提供實驗依據(jù),并為將來通過生物學(xué)方法延緩腰椎間盤退變提供新的思路。 方法 實驗組30 個椎間盤標本(L2 ~ S1)來自27 例行后路腰椎間盤切除椎間融合手術(shù)自愿捐贈的患者,男18 例,女9 例;年齡30 ~ 72 歲,平均51.09 歲。所有病變節(jié)段均經(jīng)MRI 證實,患者術(shù)前均未接受椎間盤造影、膠原酶髓核溶解或椎間盤激光汽化術(shù)。對照組20 個標本(L2 ~ S1)來自5 例青年男性意外死亡者新鮮尸檢腰椎間盤;年齡24 ~ 37 歲,平均30.83 歲。采用HE 染色觀察凋亡軟骨細胞、凋亡小體和細胞密度,TUNEL 染色法檢測人腰椎間盤中的凋亡細胞率,用SP 免疫組織化學(xué)法檢測Bax 及Caspase-3 表達,圖像分析Bax 及Caspase-3 的平均灰度值。 結(jié)果 HE 染色示對照組、實驗組軟骨終板和髓核內(nèi)的平均細胞密度分別為(17.16 ± 1.22)、(12.41 ± 0.95)個/HP,二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt;0.01)。TUNEL染色觀察示對照組的軟骨終板與髓核內(nèi)的平均凋亡細胞率為6.97% ± 0.92%,低于實驗組的12.59% ± 0.95%(P lt; 0.01)。SP 免疫組織化學(xué)染色示對照組髓核內(nèi)Bax 、Caspase-3 染色陽性細胞率分別為11.02% ± 1.18% 和9.01% ±1.00%,均低于實驗組的19.29% ± 1.18% 和15.07% ± 0.97%,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.01)。對照組腰椎間盤髓核內(nèi)Bax、Caspase-3 的平均灰度值分別為187.33 ± 7.88 和185.68 ± 3.26,實驗組分別為124.98 ± 6.69 和160.13 ± 4.37,兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.01)。將全部腰椎間盤標本進行Pearson 相關(guān)分析,對照組和實驗組腰椎間盤凋亡細胞率與細胞密度間成負相關(guān),相關(guān)系數(shù)r 分別為- 0.88 和- 0.93(P lt; 0.01);兩組髓核內(nèi)Bax、Caspase-3 陽性細胞率與凋亡細胞率之間成正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r 分別為 0.83 和 0.91(P lt; 0.01)。 結(jié)論 細胞密度下降參與了人腰椎間盤的退變過程,Bax和Caspase-3 的表達上調(diào)在人腰椎間盤髓核細胞的凋亡過程中有一定作用。
引用本文: 王棟琪 ,劉淼,宋煥瑾,王民,楊康平,張銀剛. 人退變腰椎間盤中細胞凋亡與Bax 及半胱胺酸蛋白酶蛋白3 基因的表達. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(4): 421-425. doi: 復(fù)制