目的 探討兔口腔黏膜細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法,并以其為種子細(xì)胞與異體膀胱黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)(bladder acellular matrix graft,BAMG)復(fù)合,構(gòu)建組織工程尿道。 方法 18 只10 周齡雄性新西蘭大耳白兔,體重0.3 ~ 0.5 kg。取其中12 只兔口腔黏膜組織,分離獲得口腔黏膜細(xì)胞。將口腔黏膜細(xì)胞分別接種于有3T3 細(xì)胞及無(wú)3T3細(xì)胞的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng),接種后第2 天于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,觀察生長(zhǎng)增殖情況,并行免疫熒光組織化學(xué)染色鑒定。取余6 只兔膀胱,經(jīng)脫細(xì)胞處理制備BAMG,隨機(jī)取1 cm × 1 cm 組織行HE 染色,觀察脫細(xì)胞效果。將接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)獲得的第2 代口腔黏膜細(xì)胞種植于BAMG 上,培養(yǎng)1 周后,行HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 的復(fù)合狀況。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡下觀察,接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞可傳至7 ~ 8 代,其細(xì)胞形態(tài)均一,功能良好;無(wú)3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞形態(tài)多樣,傳至第2 代時(shí),即開始出現(xiàn)老化。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示,兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞均于第8 天開始呈對(duì)數(shù)增長(zhǎng),第14 天達(dá)峰值。接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞,培養(yǎng)至融合時(shí)所獲得細(xì)胞數(shù)量明顯多于接種于無(wú)3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞。兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞行免疫熒光染色,均呈綠色熒光。HE 染色觀察,BAMG 經(jīng)脫細(xì)胞處理后未見細(xì)胞,脫細(xì)胞效果良好。復(fù)合培養(yǎng)1 周后,HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 復(fù)合良好。 結(jié)論 兔口腔黏膜細(xì)胞可在體外成功培養(yǎng)、擴(kuò)增,與同種異體BAMG 復(fù)合后生長(zhǎng)良好,為構(gòu)建組織工程尿道提供了一種新的選擇。
引用本文: 李超,徐月敏,宋魯杰,崔磊,尹爍. 應(yīng)用組織工程口腔黏膜重建尿道的初步實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(10): 1242-1245. doi: 復(fù)制