目的 糖皮質(zhì)激素會破壞軟骨,通過觀察地塞米松對人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞(human articularchondrocytes,HACs)凋亡及Fas/FasL 基因表達的影響,探討其促進HACs 凋亡的作用機制。 方法 取行人工膝關(guān)節(jié)置換的膝骨關(guān)節(jié)炎患者自愿捐贈軟骨組織,體外分離培養(yǎng)HACs,取第2 代細胞進行實驗。將HACs 分別置于含濃度為0.125、1.25、12.5、25 及50 μg/mL 地塞米松培養(yǎng)液中,培養(yǎng)48 h 后采用MTT 法選擇地塞米松最佳工作濃度進行后續(xù)實驗。將HACs 分別采用最佳工作濃度地塞米松(實驗組)及不含地塞米松培養(yǎng)液(對照組)培養(yǎng),0、24、48 h 后行TMRE/Hoechst/Annexin V-FITC/7-AAD 四重染色檢測細胞凋亡,48 h 后行實時定量PCR 檢測Fas/FasL mRNA 表達,0、24、48 h后行免疫組織化學染色檢測Fas/FasL 蛋白表達。 結(jié)果 25 μg/mL 濃度組細胞抑制率顯著高于50 μg/mL 濃度組,差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05);與其他濃度組比較,差異亦有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05);選擇25 μg/mL 濃度作為后續(xù)實驗工作濃度。培養(yǎng)0、24、48 h,實驗組HACs 凋亡細胞百分比分別為5.8% ± 0.3%、27.0% ± 2.6%、36.0% ± 3.1%,呈明顯時間依賴性(P lt; 0.05)。培養(yǎng)48 h 后實驗組及對照組Fas mRNA 相對表達量分別為(8.93 ± 1.12)× 10—3 及(3.31 ± 0.37)× 10—3,F(xiàn)asLmRNA 相對表達量分別為(5.92 ± 0.66)× 10—3 及(2.31 ± 0.35)× 10—3,兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。隨培養(yǎng)時間延長,實驗組Fas 及FasL 蛋白表達逐漸增加,且各時間點均顯著高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 地塞米松可促進HACs 細胞凋亡及上調(diào)凋亡基因Fas/FasL 表達,為進一步探討Fas/FasL 信號通路在地塞米松促HACs 凋亡中的作用提供了實驗依據(jù)。