目的探討細胞骨架重塑對體外大鼠跟腱來源肌腱干細胞（tendon stem cells,TSCs）成脂分化的影響。 方法取3周齡雄性SD大鼠跟腱組織，采用酶消化法分離、培養(yǎng)TSCs，取第3代細胞用于實驗。將細胞分別以細胞松弛素D（cytochalasin D,CYD）終濃度為0、50、100、500、1 000 ng/mL的含15%FBS的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下觀察細胞存活及形態(tài)變化，纖維肌動蛋白（fibros actin,F-actin）染色觀察細胞骨架，Western blot檢測F-actin/球狀肌動蛋白（globular actin,G-actin）比值，根據(jù)結(jié)果選擇CYD有效使用濃度進行后續(xù)實驗。取TSCs分別采用成脂誘導培養(yǎng)基（誘導組）、含CYD的成脂誘導培養(yǎng)基（CYD+誘導組）以及普通培養(yǎng)基（普通組）、含CYD的普通培養(yǎng)基（CYD+普通組）培養(yǎng)3、7 d，收集各組細胞行實時熒光定量PCR檢測成脂分化相關(guān)特異標志性基因表達，包括過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ）、脂蛋白酯酶（1ipoprotein lipase,LPL）、脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)，Western blot檢測PPARγ、aP2蛋白表達。 結(jié)果CYD濃度為100 ng/mL時既能有效干擾TSCs細胞骨架F-actin的聚合，又不影響TSCs的存活，選擇該濃度進行后續(xù)實驗。實時熒光定量PCR及Western blot檢測示，3、7 d時CYD+誘導組PPARγ、LPL和aP2基因及PPARγ、aP2蛋白表達均顯著高于誘導組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。3、7 d時CYD+普通組PPARγ、LPL和aP2基因表達也顯著高于普通組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論細胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一個先決條件，抑制F-actin聚合可促進TSCs的成脂分化，對肌腱病的發(fā)病機制研究具有重要意義。
目的：了解大鼠腦出血后血腫周圍組織細胞凋亡與神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的表達及大鼠神經(jīng)功能缺損程度的關(guān)系。方法：用膠原酶注入到大鼠尾狀核的方法制作腦出血模型。將大鼠分為腦出血、假手術(shù)組、正常組3組。采用蘇木素伊紅(HE) 染色、NSE免疫組織化學染色及TUNEL分別觀察各組在腦出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d時血腫周圍NSE及TUNEL的表達。用Longa評分法評價大鼠神經(jīng)功能缺損程度。結(jié)果：大鼠在膠原酶注入6 h后形成穩(wěn)定的血腫，在造模24～48 h神經(jīng)功能缺損程度最重；6 h即見到TUNEL陽性細胞的表達，在48 h最明顯；NSE從神經(jīng)元中漏出彌散到細胞間隙也在48 h達高峰。結(jié)論：腦出血血腫周圍凋亡與神經(jīng)功能缺損及NSE的變化有關(guān)，凋亡可能在腦出血的神經(jīng)損傷中起重要的作用。
摘要:目的:動態(tài)觀察大鼠腦出血后血腫周圍組織補體激活與細胞凋亡的規(guī)律。方法:用膠原酶注入到大鼠尾狀核的方法制作腦出血模型。將大鼠分為腦出血、假手術(shù)組、正常組3組。采用蘇木素伊紅(HE) 染色、免疫組織化學染色及原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP 缺口末端標記法(TUNEL)分別觀察各組在腦出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d時血腫周圍補體C3、促凋亡基因(Bax)、抑凋亡基因(Bclxl)及TUNEL的表達。結(jié)果補體C3的表達峰值在24~48 h;TUNEL、Bax蛋白表達術(shù)后12h增加,48~72 h達高峰,而Bclxl蛋白表達高峰在48h。結(jié)論:大鼠腦出血后血腫周圍組織補體C3的表達增加與細胞凋亡的演變趨勢一致,C3與凋亡有相關(guān)。Abstract: Objective: To study the complement activation and apoptosis regular genes changes in the tissues of the perihematoma of intracerebral hemorrhage (ICH) in rats. Methods: Intracerebral hemorrhage was induced in rats by injection of bacterial collagenase into the caudate nucleus. Histopathological changes were studied in 6 h,12 h, 24 h, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d after the injection. The immunohistochemistry and TUNEL analysis were performed. The expression of complement factor C3, the TUNELpositive cells, the proapoptotic gene expression (Bax) and the antiapoptotic gene (Bclxl) were examined. Results: The expression of C3 increased to its maximum between 2448 h. The TUNELpositive cells and Bax protein expression increased gradually and reached the peak level between 4872 h. The Bclxl protein reached the peak level at 48 h. The correlation analysis showed that the quantity of C3 was positively related to that of the TUNELpositive cells, but the bax protein was not related to Bclxl protein. Conclusion: The expression of complement factor C3 may contributes to the nerve injury after cerebral hemorrhage and relate to the apotosis in the tissues surrounding the hametoma in rats.
摘要:目的:探討卡配因抑制劑3（MDL28170）對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)神經(jīng)細胞凋亡的影響。方法:建立新生SD大鼠HIBD模型,治療組于缺養(yǎng)缺血后即刻、2 h、4 h腹腔內(nèi)注射MDL28170,對照組及手術(shù)組同時予生理鹽水。缺氧缺血后24 h用免疫組化方法觀察大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3 蛋白表達、TUNEL法檢測細胞凋亡,觀察組織病理改變并計算海馬神經(jīng)元死亡數(shù),透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果:缺氧缺血后24 h缺血側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3和TUNEL陽性細胞數(shù)較對照組明顯增加,透射電鏡證實有凋亡細胞;MDL28170可減少陽性細胞數(shù)量,抑制神經(jīng)元死亡,差異有顯著性(Plt;0.05)。結(jié)論:MDL28170可通過抑制神經(jīng)凋亡而對新生大鼠HIBD具有一定保護作用。Abstract: Objective: To investigate the effect of (Calpain inhibitor3) MDL28170 on neural apoptosis in a neonatal model of hypoxicischemic brain damage (HIBD). Methods: A neonatal model of HIBD was established, 7dayold SD rats were divided into three groups. The treatment group received MDL28170(ip) at 0 h,2 h,4 h after HI, whereas the other two groups were administered normal saline simultaneously. The expression of caspase3 (by immunohistochemistry), neural apoptosis (by TUNEL) in cortex and hippocampus ipsilateral to the insult were observed 24 h after HI; hippocampal CA1 neural loss and electromicroscopic changes were assessed at the same time. Results: Apoptotic body was observed by electromicroscopy. Caspase3 positive cells and apoptotic cells increased significantly in the ipsilateral cortex and hippocampal CA1 region compared to the control, and MDL28170 reduced the number of positive cells, attenuated CA1 neural loss with significance (Plt;0.05). Conclusion: It is suggested that MDL28170 may protect the brain of neonatal rats after HIBD by suppressing neural apoptosis.
目的 研究胃袖帶切除術(shù)（sleeve gastrectomy，SG）對GK大鼠2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）的治療作用及其可能機理。方法 將13只12周齡的GK大鼠隨機分為2組：SG組7只和假手術(shù)組（SO組） 6只，分別行SG術(shù)和假手術(shù)。于術(shù)前及術(shù)后1、4、10和26周測量2組大鼠的體質(zhì)量、24h進食量、空腹血糖值、血清胰高血糖素樣肽-1 （glucagon-like peptide-1，GLP-1）和血清生長激素釋放肽（Ghrelin）濃度；于術(shù)后10周檢測2組大鼠的糞便能量含量，并進行口服葡萄糖耐量實驗（OGTT）和胰島素耐受性實驗（ITT）。結(jié)果 ①體質(zhì)量：各時點2組大鼠的體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與術(shù)前比較，術(shù)后1周2組大鼠的體質(zhì)量均降低（P＜0.01），術(shù)后10和26周的體質(zhì)量均增加（P＜0.01）。②24h進食量：與SO組比較，術(shù)后4和10周SG組大鼠的24h進食量均較低（P＜0.05）。與術(shù)前比較，SG組大鼠術(shù)后1、4及10周的進食量均較低（P＜0.05），SO組大鼠術(shù)后1周的進食量低于術(shù)前（P＜0.05）。③空腹血糖值：與SO組比較，術(shù)后各時點SG組大鼠的空腹血糖值均較低（P＜0.01）。與術(shù)前比較，SG組大鼠術(shù)后各時點的空腹血糖值均較低（P＜0.01），而SO組大鼠僅術(shù)后1周明顯低于術(shù)前（P＜0.01）。④血清GLP-1水平：與SO組比較，術(shù)后4、10及26周SG組大鼠的血清GLP-1水平均較高（P＜0.05）。與術(shù)前比較，術(shù)后4、10及26周SG組大鼠的血清GLP-1水平較高（P＜0.05），而術(shù)后SO組大鼠的血清GLP-1水平無明顯變化（P＞0.05）。⑤血清Ghrelin水平：與SO組比較，術(shù)后各時點SG組大鼠的血清Ghrelin水平均較低（P＜0.01）。與術(shù)前比較，術(shù)后各時點SG組大鼠的血清Ghrelin水平均較低（P＜0.001），而SO組大鼠的血清Ghrelin水平無明顯變化（P＞0.05）。⑥曲線下面積（AUC）：SG組大鼠的AUC （OGTT和ITT）均較SO組低（P＜0.01）。結(jié)論 SG術(shù)可以明顯降低GK大鼠的空腹血糖值，改善葡萄糖耐量及增強胰島素敏感性，該作用可能是GLP-1、Grelin等多種胃腸道激素共同作用的結(jié)果。SG術(shù)可能是潛在的非肥胖型T2DM的治療方法。
目的 通過建立不同體積供肝的大鼠肝移植模型，探索邊緣性體積供肝大小的適宜范圍，為研究小肝綜合征的發(fā)病機理及防治措施提供一種易于復制的小動物模型。方法 將192只大鼠隨機分為全肝移植組、半肝移植組、小體積供肝移植組及超小體積供肝移植組，每組48只，分別建立全肝、半肝、小體積供肝和超小體積供肝的大鼠肝移植模型。移植術(shù)后，4組各抽取24只大鼠用于觀察存活率；抽取12只大鼠于移植術(shù)前，移植術(shù)后5、15、30、45及60min測定門靜脈壓力；另12只大鼠于術(shù)后24h測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平。結(jié)果 全肝移植組的7d累積生存率為100% （24/24），半肝移植組為87.5% （21/24），小體積供肝移植組為37.5%（9/24），超小體積供肝移植組均于術(shù)后48h內(nèi)死亡。全肝移植組術(shù)中開放門靜脈后，60min內(nèi)其門靜脈壓力穩(wěn)定；半肝移植組大鼠在開放門靜脈后，其門脈壓力雖有小幅升高，但仍保持相對穩(wěn)定；而小體積供肝移植組和超小體積供肝移植組開放門靜脈后，其門靜脈壓力均顯著升高，15min時均達到高峰，之后該2組的門靜脈壓力開始回落，至45～60min時逐漸穩(wěn)定。供肝的體積大小與開放門靜脈后5 （r=-0.942）、15 （r=-0.947）、30 （r=-0.900）、45 （r=-0.825）和60min （r=-0.705）時的門靜脈壓力均呈負相關(guān)關(guān)系（P＜0.001）。肝移植術(shù)后24 h，全肝移植組和半肝移植組ALT水平均低于小體積供肝移植組及超小體積供肝移植組（P＜0.05），且小體積供肝移植組ALT水平低于超小體積供肝移植組（P＜0.05）。供肝體積的大小與大鼠移植術(shù)后的ALT水平呈負相關(guān)關(guān)系（r=-0.685，P＜0.001）。結(jié)論 大鼠部分肝移植模型中，供肝與受體標準肝臟體積比（GV/SLV）的安全界限為50%，GV/SLV為30%～35%的供肝可視為邊緣性體積供肝，小于30%的供肝可視為超小體積供肝。
目的 建立2型糖尿病大鼠后肢缺血模型并進行評價，為后續(xù)的干預實驗提供研究平臺。方法 將15只SD大鼠隨機分為正常對照組、糖尿病組及糖尿病后肢缺血組，每組5只。糖尿病組及糖尿病后肢缺血組的10只大鼠均給予高脂飲食喂養(yǎng)4周后，腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，40 mg/kg）以建立2型糖尿病模型。糖尿病后肢缺血組大鼠建模成功后行雙側(cè)髂總動脈結(jié)扎術(shù)以建立后肢缺血模型，正常對照組和糖尿病組大鼠僅分離髂總動脈，不予結(jié)扎。2周后對3組大鼠股動脈的起始段行彩色多普勒超聲檢查，以檢測股動脈的血流峰值速度和血流加速時間；取缺血部位的小腿三頭肌及大腿股四頭肌組織，分別行HE染色及免疫組化SP染色，以觀察3組大鼠肌細胞的營養(yǎng)狀況及血管再生情況。結(jié)果 后肢缺血模型建模2周后，正常對照組、糖尿病組和糖尿病后肢缺血組大鼠的血流峰值速度分別為（22.49±3.02） cm/s、（17.36±2.60） cm/s和（11.23±1.26） cm/s，血流加速時間分別為（0.080±0.009） s、（0.120±0.009） s和（0.160±0.020） s，糖尿病后肢缺血組大鼠的股動脈血流峰值速度小于正常對照組和糖尿病組（P＜0.05），而血流加速時間較長（P＜0.05）。HE染色結(jié)果顯示：糖尿病后肢缺血組大鼠小腿三頭肌的結(jié)構(gòu)破壞，有大量炎癥細胞浸潤，肌肉損傷程度重于正常對照組和糖尿病組。免疫組化SP染色結(jié)果顯示：糖尿病后肢缺血組大鼠大腿股四頭肌的毛細血管密度〔（1.40±0.55） 個/HPF〕小于正常對照組 〔（6.80±0.84） 個/HPF〕及糖尿病組〔（4.60±0.55）個/HPF〕，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 對SD大鼠給予高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ注射可以成功誘導2型糖尿病模型，在此模型基礎上結(jié)扎髂總動脈可以成功制備糖尿病后肢缺血模型。
目的 探討建立Cajal間質(zhì)細胞數(shù)量減少模型的方法并進行驗證。方法 采用改良不完全性小腸梗阻法，用SD大鼠回腸套環(huán)，以非貫穿腸管的方式建立Cajal間質(zhì)細胞數(shù)量減少模型。肉眼觀察大鼠大體形態(tài)學改變，采用HE染色及透射電鏡觀察組織病理學改變，采用免疫組化方法檢測Cajal間質(zhì)細胞數(shù)量的變化。結(jié)果 該方法造模成功率為56%（28/50）；腸梗阻組大鼠術(shù)后與術(shù)前相比，體重減輕（P＜0.01）；剖腹后肉眼觀察，可見胃潴留明顯，梗阻腸段明顯充血、腫脹；HE染色及透射電鏡觀察見回腸組織有明顯炎性改變；免疫組化染色結(jié)果顯示Cajal間質(zhì)細胞明顯減少。結(jié)論 本模型滿足不完全性腸梗阻的基本表現(xiàn)，可致Cajal間質(zhì)細胞數(shù)量減少，可為有關(guān)Cajal間質(zhì)細胞的基礎研究提供良好的實驗動物模型。
目的 探討建立穩(wěn)定、可靠的大鼠重癥急性胰腺炎（SAP）肺損傷模型的方法，以利于胰源性急性肺損傷（ALI）及急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）疾病的研究。方法 健康Sprague-Dawley （SD）大鼠分成結(jié)扎組（n=20）、傳統(tǒng)組（n=20）和假手術(shù)組（n=20），經(jīng)膽胰管逆行注射5%?；悄懰徕c，結(jié)扎法組給予結(jié)扎膽胰管遠端，傳統(tǒng)法組不結(jié)扎，假手術(shù)組不注射5%?；悄懰徕c； 術(shù)后補液支持，觀察24 h后SAP肺組織損傷和水腫程度以及自然病程。結(jié)果 結(jié)扎組模型能誘導明顯的ALI，48 h內(nèi)全部大鼠（100%）因急性呼吸衰竭而死亡，其死亡率明顯高于傳統(tǒng)組（20%），P＜0.05。結(jié)扎組有4只大鼠出現(xiàn)胸腔積液，而傳統(tǒng)組和假手術(shù)組大鼠均未見明顯胸腔積液。 結(jié)扎組大鼠腹水量為（21.15±5.33） ml，明顯多于傳統(tǒng)組大鼠的（7.75±2.66） ml，P＜0.05，而假手術(shù)組未見明顯腹水產(chǎn)生。 結(jié)扎組大鼠血清淀粉酶為（2 470.70±399.73） U/L，明顯高于傳統(tǒng)組的（1 528.40±289.54） U/L和假手術(shù)組的（831.10±93.26） U/L，P＜0.001。 結(jié)扎組大鼠血清白蛋白水平為（6.90±1.66） g/L，明顯低于傳統(tǒng)組的（13.10±0.99） g/L和假手術(shù)組的（16.20±0.92） g/L，P＜0.001。 結(jié)扎組大鼠肺W/D為6.50±0.23，明顯大于傳統(tǒng)組的4.92±0.18和假手術(shù)組的4.61±0.16，P＜0.001。 結(jié)扎組大鼠肺組織病理評分為（29.25±1.07）分，明顯高于傳統(tǒng)組的（12.65±1.98）分和假手術(shù)組的0分， P＜0.001。 結(jié)扎組大鼠胰腺組織病理評分為（15.95±0.15）分，明顯高于傳統(tǒng)組的（13.75±0.66）分和假手術(shù)組的（0.13±0.29）分，P＜0.001。電鏡下見，結(jié)扎組大鼠肺毛細血管基膜水腫溶解，連續(xù)性中斷； 細胞核變形、溶解； 內(nèi)皮吞飲小泡增多，功能活躍； 細胞間緊密連接水腫模糊，甚至破裂； 肺泡上皮細胞間緊密連接破壞、間隙明顯變寬，其超微結(jié)構(gòu)病理變化明顯較傳統(tǒng)組嚴重，而假手術(shù)組肺組織在電鏡下未見明顯病理學改變。結(jié)論 本實驗動物模型可重現(xiàn)臨床上膽源性SAP并發(fā)ALI或ARDS的發(fā)病過程，適用于研究SAP早期誘發(fā)嚴重肺損傷的相關(guān)機理，可為研究胰源性ALI提供良好的實驗動物模型。
目的 通過線栓法制備大鼠慢性后肢缺血模型，將其與急性后肢缺血模型進行比較研究。方法 采用線栓法制備Lewis大鼠慢性后肢缺血模型，分別于術(shù)后第7、14、28、42及49天進行激光多普勒血流分析及血管造影。每組動物在血管造影后處死，分別取其健側(cè)和患側(cè)股四頭肌和腓腸肌行HE染色及α-actin免疫組織化學染色，并計算小動脈密度。結(jié)果 慢性后肢缺血模型組動物術(shù)后未出現(xiàn)明顯的跛行和肢體壞死。血流分析發(fā)現(xiàn)，慢性后肢缺血模型在術(shù)后第49天仍處于缺血狀態(tài)。后肢肌肉組織病理學檢查未發(fā)現(xiàn)急性壞死和肌肉纖維化的表現(xiàn)。術(shù)后第7天，慢性缺血組股四頭肌的小動脈密度低于急性缺血組（0.015 2比0.036 4）。結(jié)論 線栓法制備大鼠慢性后肢缺血模型與目前采用的急性動物后肢缺血模型制備方法有顯著的不同， 其缺血肢體較少受到代償機制的影響且缺血時間維持較長，此為進一步研究缺血后血管新生的機理和治療嚴重的下肢缺血提供了一種新的動物模型。