華西醫(yī)學期刊出版社
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  • 增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料的促血管化作用

    目的 骨組織工程所使用的支架材料能否快速、有效地血管化是骨修復的關鍵。研究增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料對血管化的協(xié)同和促進作用,為構建血管化組織工程骨修復骨缺損尋找適宜的支架材料。 方法 體外分離獲取人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并通過血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)與CD34 抗原鑒定,取第1 代細胞用于實驗。將細胞接種于增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料上,掃描電鏡觀察細胞黏附情況。取細胞接種于增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料作為實驗組,等量細胞直接接種于培養(yǎng)板常規(guī)培養(yǎng)作為對照組,采用alarmarBlue 法動態(tài)檢測細胞增殖率,實時熒光定量PCR 檢測內皮細胞相關基因VEGF、血管內皮生長因子受體1(fms-related tyrosine kinase 1,Flt-1)、血管內皮生長因子受體2(kinase insert domain receptor,Kdr)的mRNA 表達。取SD 大鼠6 只,將支架材料包埋于大鼠股內側皮下,實驗組采用增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料、中央軸向植入血管束,對照組采用非增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料,分別于植入5、10 d 取出,行冰凍切片并HE 染色動態(tài)觀察支架材料內部的血管化狀態(tài)。 結果 分離的細胞通過形態(tài)學及vWF、CD34 免疫熒光鑒定為HU VECs。掃描電鏡示HUVECs 在支架材料上黏附較好。HUVECs 在實驗組支架材料上增殖明顯,在第3 天后細胞增殖率開始高于對照組,11 d 達到增殖平臺期時細胞數仍多于對照組(P lt; 0.05)。實時熒光定量PCR 檢測示,培養(yǎng)3 d 實驗組VEGF、Flt-1、Kdr 的mRNA 表達均顯著高于對照組(P lt; 0.05)。包埋大鼠皮下實驗可見,實驗組5、10 d 時植入的血管仍通暢,其周圍新生血管隨時間延長而增多,材料周緣可見宿主血管浸潤生長,但新生血管稀疏;對照組僅有纖維組織生長,10 d 時材料已大部分降解,組織難以長入。 結論 增強型生物活性玻璃/ 膠原復合材料在大鼠體內外可促進血管化,可能適于作為構建血管化組織工程骨的支架材料。

    發(fā)表時間:2016-08-31 05:43 導出 下載 收藏 掃碼
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