【摘 要】 目的 體外分離培養(yǎng)人羊水間充質(zhì)干細胞（human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells，HAFMSCs），觀察低溫凍存復蘇后HAFMSCs 生物學特征，為進一步研究奠定理論基礎(chǔ)。 方法 取12 份自愿捐贈的孕16 ～ 20 周羊水標本，采用改良兩步法分離培養(yǎng)HAFMSCs，用含量不同的FBS、DMSO 凍存液凍存細胞，液氮凍存12 周后42℃水浴復蘇，錐蟲藍染色檢測細胞存活率，MTT 法檢測細胞增殖速度并繪制生長曲線，流式細胞儀檢測凍存復蘇后HAFMSCs 表型。對凍存復蘇后的HAFMSCs 進行成脂、成骨誘導分化培養(yǎng)，并分別采用油紅O、von Kossa 染色進行鑒定；實時熒光定量PCR 分析細胞凍存前后Oct-4、Nanog mRNA 表達差異。 結(jié)果 細胞凍存12 周后，不同的凍存方案對細胞存活率影響有差異，優(yōu)化的凍存方案為DMEM/FBS/DMSO=50%/40%/10%。凍存復蘇后的HAFMSCs 呈漩渦狀排列，生長曲線呈S 形，與凍存前細胞生長曲線相似。流式細胞儀檢測示凍存復蘇后細胞的MSCs 表型CD29、CD44、CD73、CD90 為陽性，造血干細胞表型CD34、CD45 為陰性。成脂、成骨誘導21 d，油紅O、von Kossa 染色均呈陽性。實時熒光定量PCR 檢測示凍存前后Oct-4、Nanog mRNA 表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 HAFMSCs 具有體外增殖快、分化能力強的優(yōu)勢；并可耐受短期凍存，復蘇后細胞存活率高，生物學特征及分化潛能未發(fā)生明顯變化，凍存液DMEM/FBS/DMSO=50%/40%/10% 是較好凍存方案。