目的 比較采用兩種不同方法接種的hBMSCs 在生物珊瑚支架中的三維空間分布和基因表達。 方法 采用傳統(tǒng)接種法(A 組)和纖維蛋白凝膠接種法(B 組)構(gòu)建hBMSCs 和生物珊瑚支架復合體。A 組孵育3 h,B 組孵育30 min 后檢測兩組細胞接種效率。培養(yǎng)后2、7、14、21 d,兩組分別取材行DAPI 染色后,熒光顯微鏡觀察,采用AxioVision 圖像分析軟件測量每個切片10 倍物鏡視野中的細胞數(shù)量,以切片的不同水平區(qū)域(從表面到底部為L1 ~ L5)和垂直區(qū)域(從中心到邊緣)比較兩組細胞分布情況;采用實時熒光RT-PCR 檢測成骨分化基因骨凝集素(osteonectin,ON)、核心結(jié)合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)和骨鈣素(osteocalcin,OC)表達。 結(jié)果 B 組細胞接種效率為88.32% ± 4.20%,明顯高于A組66.51% ± 12.33%(P lt; 0.01)。培養(yǎng)后2 d,兩組細胞水平區(qū)域分布由L1 ~ L4 逐漸減少(P lt; 0.05);垂直區(qū)域細胞數(shù)目比較,A 組差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05),B 組差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05);兩組間各成骨分化基因表達比較差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。培養(yǎng)后 7 d,A 組細胞數(shù)目較2 d 時逐步減少,各水平區(qū)域間細胞數(shù)目比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05),而B 組細胞數(shù)目和各成骨分化基因表達量迅速增加,各水平區(qū)域細胞數(shù)目趨于平衡,細胞分布均勻(P gt; 0.05),ON 和Cbfα1 基因表達量明顯高于A 組,差異有統(tǒng)計學意義(Plt; 0.05)。培養(yǎng)后14 d,A 組各水平及垂直區(qū)域內(nèi)的細胞數(shù)目均較7 d 時急速減少(P lt; 0.05),B 組細胞增殖良好且細胞總數(shù)與7 d 時相近;B 組OC 基因表達量達峰值,兩組間各基因表達比較差異均有統(tǒng)計學意義(Plt; 0.05)。培養(yǎng)后21 d,兩組各水平區(qū)域細胞數(shù)目和兩組間各基因表達比較差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05);兩組各垂直區(qū)域細胞數(shù)目比較差異均無統(tǒng)計學意義(Pgt; 0.05)。培養(yǎng)后714、21 d,B 組大部分區(qū)域細胞數(shù)目均較A 組多,差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 通過纖維蛋白凝膠接種較傳統(tǒng)方法接種可使hBMSCs 在支架中空間分布更均勻,能達到更快的細胞增殖和更有效的成骨分化。