目的 探討兔橈骨缺損采用同種異體骨及自體骨移植修復后 VEGF 及微血管密度(microvessel density,MVD)的表達及意義。? 方法 健康成年新西蘭大白兔 40 只,其中 12 只作為同種異體骨供體,另 28 只作為實驗受體。按美國組織庫標準制備同種異體骨。取受體實驗動物,制備雙側(cè)橈骨中段 10 mm 骨缺損模型。右側(cè)橈骨骨缺損內(nèi)植入自體髂骨骨粒(對照組);左側(cè)取等量同種異體骨粒同法植入(實驗組)。于術(shù)后 2、4、8、12 周,采用免疫組織化學方法檢測骨缺損修復組織內(nèi) VEGF、CD34 蛋白的表達,并對 CD34 表達陽性血管進行 MVD 計數(shù)。術(shù)后 12 周,對不脫鈣組織切片行 von Kossa 染色,行骨形態(tài)計量學參數(shù) [ 骨小梁相對體積(percent trabecular area,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁數(shù)量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁分離度(trabecular separation,Tb.Sp)] 檢測,并對 VEGF蛋白表達與骨形態(tài)計量學參數(shù)、 MVD 計數(shù)的相關(guān)性進行分析。? 結(jié)果 VEGF 蛋白陽性物質(zhì)主要定位于血管內(nèi)皮細胞、纖維母細胞、軟骨細胞、部分破骨細胞和成骨細胞。術(shù)后 2 周,實驗組及對照組 VEGF 蛋白表達灰度值比較差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05);術(shù)后 4、8 周,對照組 VEGF 蛋白表達優(yōu)于實驗組(P lt; 0.05);而術(shù)后 12 周,兩組 VEGF 蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。術(shù)后 2、4、8、12 周,兩組 VEGF 蛋白表達與 MVD 之間均成正相關(guān)(P lt; 0.01)。術(shù)后 12 周,骨形態(tài)計量學參數(shù) BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp 組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05),而 VEGF 蛋白與 BV/TV、Tb.N、Tb.Th 成正相關(guān),與 Tb.Sp 成負相關(guān)(P lt; 0.01)。? 結(jié)論 VEGF 在骨缺損愈合不同時期、不同部位表達各異,可協(xié)調(diào)軟骨及骨形成并與其血運重建關(guān)系密切; VEGF 可能對同種異體骨移植修復骨缺損起促進作用。
目的 探討大鼠BMSCs 來源的成骨細胞、血管內(nèi)皮細胞復合異體凍干顆粒骨的黏附性,為構(gòu)建血管化組織工程骨奠定實驗基礎(chǔ)。 方法 取4 周齡SD 大鼠,雌雄不限,體重100 ~ 110 g,分離培養(yǎng)BMSCs,取生長狀態(tài)良好的第3 代BMSCs 行成骨誘導培養(yǎng)及成血管內(nèi)皮細胞誘導培養(yǎng)并鑒定。將誘導7 d 的兩種細胞按1 ∶ 1 比例混合培養(yǎng),作為實驗組;以生長狀態(tài)良好未誘導的第2 代BMSCs 作為對照組。培養(yǎng)后1 ~ 8 d 采用 MTT 法測定細胞增殖并繪制生長曲線。取誘導14 d 的兩種細胞分別按0.25 × 106、0.50 × 106、1.00 × 106、2.00 × 106、4.00 × 106 個/mL 接種于20% Col Ⅰ修飾前后的異體凍干顆粒骨(修飾組與未修飾組),接種后24 h 計算細胞黏附率。將誘導14 d 的兩種細胞按1 ∶ 1 比例混合,以總細胞密度2 × 106 個/mL 接種于修飾后異體凍干顆粒骨,掃描電鏡觀察細胞在支架上的生長情況。 結(jié) 果 BM SCs 成骨誘導7 d,ALP 染色示胞漿內(nèi)可見藍染顆粒,胞核呈紅色;成血管內(nèi)皮細胞誘導14 d,CD31、CD34 免疫細胞化學染色呈陽性。MTT 檢測結(jié)果顯示,實驗組細胞增殖較對照組緩慢,培養(yǎng)3 ~ 8 d 兩組細胞吸光度值差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。細胞接種密度為(0.25 ~ 1.00)× 106個/mL 時,兩組黏附率隨接種密度增加而上升;接種密度為1.00 × 106個/mL 時,黏附率達最高;當接種密度gt; 2.00 × 106個/mL,黏附率明顯降低。兩組各細胞接種密度間的黏附率比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。掃描電鏡觀察顯示,體外誘導的成骨細胞與血管內(nèi)皮細胞黏附于支架上仍可分化增殖,細胞胞體見絲狀偽足。 結(jié)論 大鼠BMSCs 誘導培養(yǎng)的成骨細胞與血管內(nèi)皮細胞在20% Col Ⅰ修飾的異體凍干顆粒骨上生長狀態(tài)良好,可用于構(gòu)建血管化組織工程骨。