目的 為給單胚胎移植的臨床應(yīng)用提供更可靠的證據(jù)，對(duì)國(guó)內(nèi)外公開發(fā)表的選擇性單個(gè)與兩個(gè)卵裂期胚胎移植的臨床研究進(jìn)行Meta分析。方法 計(jì)算機(jī)檢索PubMed、Ovid、EMbase、MEDLINE、CENTRAL等中外生物醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，收集有關(guān)選擇性單個(gè)與兩個(gè)卵裂期胚胎移植的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT）。按Cochrane系統(tǒng)評(píng)價(jià)方法，由兩位研究者獨(dú)立選擇文獻(xiàn)、提取資料并評(píng)價(jià)納入研究的方法學(xué)質(zhì)量后，采用RevMan 5.1軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入9個(gè)RCT，共計(jì)2 784例患者，其中試驗(yàn)組1 452例，對(duì)照組1 332例。Meta分析結(jié)果顯示：與兩個(gè)卵裂期胚胎移植比較，選擇性單個(gè)卵裂期胚胎移植降低了每個(gè)移植周期的活產(chǎn)率［RR=0.66，95%CI（0.59，0.73），Plt;0.000 01］，顯著降低了多胎妊娠率［RR=0.05，95%CI（0.02，0.11），Plt;0.000 01］，亦降低了早產(chǎn)兒發(fā)生率［RR=0.39，95%CI（0.26，0.60），Plt;0.000 1］和低體重兒發(fā)生率［RR=0.25，95%CI（0.15，0.44），Plt;0.000 01］，但對(duì)異位妊娠率［RR=0.55，95%CI（0.11，2.77），P=0.47］、流產(chǎn)率［RR=1.33，95%CI（0.92，1.91），P=0.13］和圍產(chǎn)兒死亡率［RR=0.31，95%CI（0.03，2.76），P=0.29］無(wú)影響。結(jié)論 與兩個(gè)胚胎移植相比，選擇性單胚胎移植降低了每移植周期臨床妊娠率、多胎妊娠率、早產(chǎn)兒發(fā)生率及低體重兒發(fā)生率，在其他指標(biāo)方面兩組無(wú)顯著差異。
目的 系統(tǒng)評(píng)價(jià)來(lái)曲唑+促性腺激素釋放激素拮抗劑方案對(duì)體外受精-胚胎移植（IVF-ET）中低反應(yīng)患者促排卵的有效性。方法 計(jì)算機(jī)檢索VIP、CNKI、PubMed、EMbase和FMJS，收集有關(guān)來(lái)曲唑+拮抗劑方案對(duì)體外受精-胚胎移植低反應(yīng)患者促排卵有效性的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)或臨床對(duì)照試驗(yàn)。由2位評(píng)價(jià)員根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)篩選、資料提取和質(zhì)量評(píng)價(jià)后，采用RevMan 5.0軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 最終納入6個(gè)研究，共977例患者。Meta分析結(jié)果顯示：對(duì)體外受精-胚胎移植中低反應(yīng)患者，來(lái)曲唑+拮抗劑方案與對(duì)照組相比，Gn用量［MD= –8.05，95%CI（–13.67，–2.43），P=0.005］、HCG日E2值［MD= –1 026.41，95%CI（–1 949.61，–103.20），P=0.03］均小于對(duì)照組；而兩組獲卵數(shù)［MD= –0.61，95%CI（–2.41，–1.19），P=0.51］和臨床妊娠率［OR=1.03，95%CI（0.53，2.02），P=0.92］無(wú)明顯差異。結(jié)論 對(duì)IVF-ET低反應(yīng)患者促排卵治療的有效性而言，來(lái)曲唑+拮抗劑方案較對(duì)照組臨床結(jié)局無(wú)明顯改善，但能減少Gn用量，降低IVF治療費(fèi)用。來(lái)曲唑+拮抗劑方案為卵巢低反應(yīng)患者提供了另一種臨床選擇。由于納入文獻(xiàn)存在質(zhì)量和數(shù)量不足以及方法學(xué)差異，建議本研究結(jié)論僅作為臨床分析的參考，尚需后效評(píng)價(jià)和不斷更新。
目的 系統(tǒng)性評(píng)價(jià)促性腺激素釋放激素（GnRH）拮抗劑在體外受精-胚胎移植治療中的有效性。方法 計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（1979～2010）、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)（1994～2010）、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)專題全文數(shù)據(jù)庫(kù)（1994～2010）、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)期刊數(shù)據(jù)庫(kù)（1989～2010）和PubMed（1997～2010）、ProQust Medical Library（1997～2010）、外文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（2000～2010），并手檢相關(guān)雜志，查找GnRH拮抗劑與GnRH激動(dòng)劑比較在體外受精-胚胎移植治療中有效性的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)。按照納入與排除標(biāo)準(zhǔn)選擇試驗(yàn)、評(píng)價(jià)質(zhì)量后進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入6個(gè)RCT，合計(jì)1 208例患者，其方法學(xué)質(zhì)量均為B級(jí)。Meta分析結(jié)果顯示：與GnRH激動(dòng)劑組相比，GnRH拮抗組刺激天數(shù)［WMD= –1.07，95%CI（–1.38，–0.76）］和獲卵數(shù)［WMD= –1.80，95%CI（–2.48，–1.12）］均更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而在Gn量［WMD= –0.49，95%CI（–1.63，0.66）］、HCG日子宮內(nèi)膜厚度［WMD= –0.09，95%CI（–0.42，0.24）］、妊娠率［Peto OR=0.83，95%CI（0.65，1.05）］、OHSS率［Peto OR=0.77，95%CI（0.35，1.72）］和流產(chǎn)率［Peto OR=1.49，95%CI（0.79，2.82）］上，兩組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 GnRH拮抗劑較之GnRH激動(dòng)劑刺激天數(shù)短，所需Gn量少，不明顯影響妊娠率，同時(shí)可減少OHSS的發(fā)生，臨床上使用相對(duì)靈活，具有較好的接受性，為體外受精-胚胎移植超促排卵治療提供了另一種選擇。受納入研究質(zhì)量和例數(shù)限制，上述結(jié)論尚需開展更多設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩嘀行?、大樣本隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)予以證實(shí)和更新。
目的 探討3種不同助孕方案在≥40歲婦女體外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期中的臨床效果。 方法 回顧性分析2010年8月－2012年2月期間，于四川大學(xué)華西第二醫(yī)院生殖中心行IVF-ET助孕、年齡≥40歲婦女共245個(gè)周期的臨床資料，排除一側(cè)卵巢缺如患者3例，余242個(gè)周期根據(jù)助孕方案不同分為3組：拮抗劑組（GnRH-A方案組）44個(gè)周期、長(zhǎng)方案組109個(gè)周期及短方案組89個(gè)周期，比較3種方式助孕的臨床效果。 結(jié)果 3組均無(wú)早發(fā)黃體生成素峰；長(zhǎng)方案組應(yīng)用促性腺激素（Gn）的時(shí)間最長(zhǎng)，應(yīng)用Gn數(shù)量最多，獲得最高的獲卵數(shù)及獲胚數(shù)（P＜0.05）；3組的受精率、優(yōu)胚率、冷凍胚胎數(shù)、周期取消率、卵巢過(guò)度刺激綜合征發(fā)生率、早期流產(chǎn)率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），短方案組的種植率及臨床妊娠率最低（P＜0.05）。 結(jié)論 GnRH-a長(zhǎng)方案在≥40歲婦女的IVF-ET周期中具有較好的臨床結(jié)局，在≥40歲婦女IVF-ET周期中具有與長(zhǎng)方案相似的結(jié)局，并且可以減少Gn使用量，提高卵泡及胚胎質(zhì)量，短方案組對(duì)≥40歲婦女臨床效果較差。
介紹胚胎先灌后切多臟器聯(lián)合切取供帶血管胰及甲狀腺——甲狀旁腺移植的1例經(jīng)驗(yàn)。作者認(rèn)為此法可避免熱缺血損害，并能同時(shí)提供多個(gè)臟器，優(yōu)于常規(guī)的先切后灌法，從而為解決大齡胎尸供著缺乏的矛盾提供了一條新途徑。
目的 利用直接貼壁法體外誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞，并檢測(cè)其分化效率。 方法 人胚胎干細(xì)胞以1×105個(gè)/cm2的細(xì)胞密度傳代到鋪備有基質(zhì)膠的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，用帶8 ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)6 d后，更換為RPMI 1640-B27培養(yǎng)基，同時(shí)加入100 ng/ml的人重組activin A處理24 h，接著再加入10 ng/ml的人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白4 （BMP4） 處理4 d，之后更換為不帶誘導(dǎo)因子的RPMI 1640-B27培養(yǎng)基，每隔2～3 d換1次培養(yǎng)基，持續(xù)2～3周。在光學(xué)顯微鏡下觀察記錄出現(xiàn)跳動(dòng)心肌細(xì)胞的時(shí)間和跳動(dòng)頻率，并計(jì)算跳動(dòng)克隆百分比，24孔板一組，共記錄4組96孔；用免疫熒光染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞特異標(biāo)志物心肌肌鈣蛋白T （cTnT）；膜片鉗實(shí)驗(yàn)檢測(cè)心肌細(xì)胞自發(fā)性動(dòng)作電位；跳動(dòng)心肌細(xì)胞經(jīng)過(guò)24 h缺氧刺激后，用凋亡試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡比例。結(jié)果 大量的自發(fā)跳動(dòng)心肌細(xì)胞在誘導(dǎo)分化13 d左右開始出現(xiàn)。分化出現(xiàn)自發(fā)跳動(dòng)心肌細(xì)胞的時(shí)間為（13.0±1.1） d，百分比為66.7%，跳動(dòng)頻率為（63.0±7.0）次/分；跳動(dòng)心肌細(xì)胞cTnT染色陽(yáng)性；跳動(dòng)心肌細(xì)胞檢測(cè)到自發(fā)性動(dòng)作電位；跳動(dòng)心肌細(xì)胞缺氧24 h后檢測(cè)到凋亡比率為8.0%±0.5%。 結(jié)論 國(guó)內(nèi)首次利用直接貼壁法在體外誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞，分化效率達(dá)到66.7%，分化時(shí)間13 d左右。
目的建立一種安全、有效、經(jīng)濟(jì)且適于人孤雌胚胎干細(xì)胞（human parthenogenetic embryonic stem cells，hPESCs）體外培養(yǎng)的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。 方法將常規(guī)體外培養(yǎng)的hPESCs分別以mTeSRTMl培養(yǎng)基（對(duì)照組）和人包皮成纖維細(xì)胞的條件培養(yǎng)基（human foreskin fibroblasts-conditional medium，hFFs-CM）（實(shí)驗(yàn)組）擴(kuò)增培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察兩組無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系下hPESCs的生長(zhǎng)狀態(tài)；采用ALP檢測(cè)和核型分析研究hPESCs生物學(xué)特性；采用RT-PCR檢測(cè)hPESCs全能性標(biāo)記物Oct-4的表達(dá)情況；通過(guò)體外和體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)觀察hPESCs向3個(gè)胚層分化的潛能。 結(jié)果兩組hPESCs形態(tài)規(guī)則、不易分化，在形態(tài)、擴(kuò)增速度等方面無(wú)明顯差異；已成功在體外培養(yǎng)15代，兩組均能保持正常女性的二倍體核型46，XX和全能性；RT-PCR檢測(cè)示兩組Oct-4 mRNA均呈陽(yáng)性表達(dá)；體外分化均可形成擬胚體；在裸鼠體內(nèi)均可形成含有3個(gè)胚層組織成分的畸胎瘤。 結(jié)論hFFs-CM無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系可長(zhǎng)期支持hPESCs的生長(zhǎng)并維持其未分化狀態(tài)，成功建立了一種不僅能維持hPESCs的有效擴(kuò)增、減少動(dòng)物源性污染、降低培養(yǎng)成本，還可滿足臨床大規(guī)模應(yīng)用的hPESCs無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。
目的 采用單層分步法誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞（human embryonic stem cells，hESCs）分化為肝樣細(xì)胞，建立hESCs 分化為肝細(xì)胞的誘導(dǎo)體系。 方法 將hESC 株H1 細(xì)胞接種到Matrigel 包被的培養(yǎng)板上，早期（細(xì)胞貼壁4 d 后）加入含有細(xì)胞因子活化素A（Activin A）的分化液誘導(dǎo)5 d；中期將誘導(dǎo)液換為含F(xiàn)GF-1 和BMP-4 的肝分化液誘導(dǎo)6 d；最后添加肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）和制癌蛋白M（Oncostatin M，OSM）繼續(xù)誘導(dǎo)分化5 ～ 7 d。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、RT-PCR、過(guò)碘酸- 雪夫（Periodicacid-Schiff，PAS）反應(yīng)鑒定分化細(xì)胞的性質(zhì)。 結(jié)果 經(jīng)ActivinA、FGF-1、BMP-4、HGF 和OSM 連續(xù)誘導(dǎo)的hESCs 呈多角形、卵圓形或圓形，排列緊密；部分細(xì)胞出現(xiàn)二核或三核，呈現(xiàn)肝細(xì)胞所特有的形態(tài)。分化細(xì)胞在誘導(dǎo)早期表達(dá)SOX17、叉頭框（Forkhead box，F(xiàn)OX）A2、GATA-4，中期表達(dá)甲胎蛋白（αfetoprotein，AFP）、白蛋白、角蛋白18，晚期表達(dá)成熟肝細(xì)胞特異性基因乙醇脫氫酶1C、細(xì)胞色素P4501B1。免疫細(xì)胞化學(xué)染色示，Activin A 誘導(dǎo)后，細(xì)胞呈SOX17 和FOXA2 陽(yáng)性；經(jīng)FGF-1 和BMP-4 誘導(dǎo)后，呈AFP 和α1 抗胰蛋白酶陽(yáng)性。HGF 和OSM 誘導(dǎo)后，PAS 糖原染色檢測(cè)陽(yáng)性。 結(jié)論 采用單層分步法逐步添加細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)hESCs 分化為肝樣細(xì)胞。該分化體系可為肝細(xì)胞移植、肝組織工程等臨床治療提供一個(gè)有效的細(xì)胞來(lái)源。
目的 采用簡(jiǎn)單貼壁培養(yǎng)方法誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell，ESC）分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞，為組織工程血管及細(xì)胞替代治療提供新的種子細(xì)胞。 方法 小鼠ESC 株SV129 按2 × 104 個(gè)/cm2 密度傳代培養(yǎng)，采用ESC培養(yǎng)基添加1 000 U/mL 白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor，LIF）維持其未分化狀態(tài)。撤除LIF，ESC 懸浮培養(yǎng)形成擬胚體（embryoid body，EB），將培養(yǎng)第4 天的EB 置于含VEGF 的培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化。采用免疫組織化學(xué)染色、流式細(xì)胞儀分析、DiI 標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍祝?，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindocarbocyanine-labeled acetylated low density lipoprotein，DiI-Ac-LDL）攝取實(shí)驗(yàn)以及透射電鏡檢查鑒定分化細(xì)胞的性質(zhì)。 結(jié)果 分化產(chǎn)生的內(nèi)皮樣細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)特征，能攝取DiI-Ac-LDL。ESC 誘導(dǎo)分化培養(yǎng)產(chǎn)生的第15 代細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色呈Flk-1 和CD31 陽(yáng)性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)ESC 傳至9 代后CD31 陽(yáng)性細(xì)胞gt; 90%；透射電鏡可見懷布爾- 帕拉德體及內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接。 結(jié)論 采用簡(jiǎn)單貼壁培養(yǎng)的方法，單獨(dú)使用VEGF 即可誘導(dǎo)ESC 分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞。誘導(dǎo)培養(yǎng)方法操作簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，可為組織工程血管及細(xì)胞替代治療提供所需內(nèi)皮樣細(xì)胞
目的 探討1，25（OH）2VD3在誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells，ESCs）向成骨細(xì)胞分化過(guò)程中的重要作用。 方法 取2 d 齡昆明小白鼠顱蓋骨進(jìn)行成骨細(xì)胞分離培養(yǎng)；參照并改進(jìn)zur Nieden 等的方法制備擬胚體（embryoid bodies，EBs）。將EBs 根據(jù)培養(yǎng)液不同分為4 組：A 組：不含白血病抑制因子EBs 培養(yǎng)液；B 組：EBs 培養(yǎng)液中添加50 μg/mL 維生素C、50 mmol/L β- 磷酸甘油；C 組：培養(yǎng)液同B 組，另每孔接種5 × 104 個(gè)第3 代成骨細(xì)胞；D組與C 組相同，另添加4 × 10-9 mol/L 1，25（OH）2VD3。檢測(cè)ALP 活性，實(shí)時(shí)定量PCR 檢測(cè)骨鈣素mRNA 的表達(dá)，茜素紅S 染色進(jìn)行礦化骨結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)。 結(jié)果 EBs 貼壁后前5 d，各組ALP 表達(dá)未發(fā)生明顯變化，5 d 后ALP 表達(dá)逐漸增加，其中D 組在第20 天表達(dá)水平最高。光鏡下可見輪廓清晰大小不等的紅色結(jié)節(jié)。茜素紅S 染色測(cè)得A、B、C、D 組骨結(jié)節(jié)數(shù)分別為（20 ± 8）、（18 ± 5）、（31 ± 1）、（50 ± 1）個(gè)；實(shí)時(shí)定量PCR 測(cè)得A、B、C、D 組骨鈣素 mRNA 分別為10.18 ± 1.17、20.29 ± 1.03、18.84 ± 4.07、32.15 ± 5.23；C、D 組與A、B 組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），A、B 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），C、D 組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 在濃度為4 × 10-9 mol/L 1，25（OH）2VD3和維生素C、β- 磷酸甘油共同作用下，有效促進(jìn)了ESCs 源性成骨細(xì)胞的產(chǎn)生。