目的 富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)具有刺激椎間盤細胞增殖、促進細胞外基質(zhì)合成代謝及抑制纖維環(huán)細胞凋亡等作用。通過觀察自體PRP干預(yù)兔早期椎間盤退變,明確其治療效果,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法取健康成年新西蘭大白兔45只,體重2.5~3.0 kg,雌雄不限;隨機分為實驗組、對照組、假手術(shù)組(n=15)。取實驗組兔耳中央動脈血,采用Landesberg等方法制備PRP,同時對全血及PRP行血小板計數(shù)。實驗組及對照組采用纖維環(huán)針刺法建立L4、5及L5、6椎間盤退變模型,造模2周后于L4、5及L5、6椎間隙分別注入100 ?L自體PRP及100 ?L PBS液;假手術(shù)組僅分離暴露椎間盤,不作處理。觀察實驗動物造模后一般情況;造模2周及干預(yù)1、2周時各組取5只實驗動物行腰椎MRI、HE染色及Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察,腰椎MRI退變程度分級及Ⅱ型膠原陽性積分吸光度(IA)值檢測。 結(jié)果兔PRP中血小板計數(shù)約為外周血的4.92倍。實驗動物均存活至實驗完成。造模2周時,與假手術(shù)組相比,實驗組和對照組椎間盤信號降低,髓核細胞減少,基質(zhì)退變,Ⅱ型膠原表達降低。腰椎MRI退變程度分級及Ⅱ型膠原陽性IA值結(jié)果顯示,各時間點實驗組、對照組與假手術(shù)組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05),干預(yù)1、2周時,實驗組MRI退變程度分級顯著低于對照組 (P lt; 0.05),但仍與假手術(shù)組有差異(P lt; 0.05);干預(yù)1、2周時,實驗組髓核細胞及軟骨樣基質(zhì)較對照組增多,基質(zhì)纖維化程度輕,Ⅱ型膠原表達明顯強于對照組(P lt; 0.05)。 結(jié)論椎間盤內(nèi)注射自體PRP可終止甚至一定程度逆轉(zhuǎn)兔早期椎間盤退變,可能與PRP含有多種生長因子調(diào)控細胞功能、改善組織微環(huán)境、促進組織再生修復(fù)有關(guān)。
目的?探討生長分化因子7(growth differentiation factor 7,GDF-7)在體外能否促進BMSCs向肌腱細胞分化,為改善BMSCs修復(fù)肌腱療效提供依據(jù)。?方法?采用密度梯度離心法從綠熒光大鼠骨髓組織中分離培養(yǎng)BMSCs,通過成骨、成脂和成軟骨分化鑒定其多向分化能力。取第3代BMSCs根據(jù)成肌腱培養(yǎng)液中加入不同濃度GDF-7(0、12.5、25.0、50.0 ng/mL),分為A、B、C、D組。體外誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后,實時熒光定量PCR檢測各組scleraxis、tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型膠原mRNA表達,免疫細胞化學染色觀察tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型膠原蛋白表達,Western blot法檢測A、C組tenomodulin蛋白的表達。?結(jié)果?經(jīng)鑒定,分離培養(yǎng)的BMSCs具有成骨、成脂和成軟骨分化的多向分化能力。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果示,B、C、D組的tenomodulin mRNA表達分別較A組增加了2.85、3.41、3.07倍(P lt; 0.05),scleraxis mRNA表達增加了2.13、1.50、2.56倍(P lt; 0.05),tenascin C mRNA表達增加了2.45、2.86、1.88倍(P lt; 0.05),但B、C、D組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。B、C組Ⅰ型膠原mRNA表達較A組分別增高了1.92和2.45倍(P lt; 0.05);D組較A組有所增高,但差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。免疫細胞化學染色示,B、C、D組均有tenomodulin、tenascin C 和Ⅰ型膠原蛋白表達,而A組均未表達;除C組Ⅰ型膠原表達高于B、D組外,其他蛋白表達B、C、D組間無明顯差異。Western blot檢測示C組比A組有更高的tenomodulin蛋白表達。?結(jié)論?GDF-7在體外能促進大鼠BMSCs向肌腱細胞分化。
目的介紹保守治療、內(nèi)固定、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)和多學科綜合診療(multidisciplinary team,MDT)模式等治療老年股骨頸骨折的研究進展。方法廣泛查閱國內(nèi)、外近年相關(guān)文獻,對多種老年股骨頸骨折治療方法、新治療模式的特點和應(yīng)用進行總結(jié)分析。結(jié)果老年非移位型股骨頸骨折應(yīng)手術(shù)治療,保守治療繼發(fā)移位風險高。移位型骨折則應(yīng)盡早進行手術(shù),人工半髖、全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后患者的遠期功能結(jié)果沒有差別。人工半髖關(guān)節(jié)置換術(shù)中出血量少、手術(shù)時間短,適合基礎(chǔ)情況不佳的高齡患者;人工全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)適合基礎(chǔ)情況較好、對生活質(zhì)量要求較高的老年患者。MDT 可有效減少患者術(shù)前等待時間和住院時間、降低內(nèi)科并發(fā)癥發(fā)生率、改善患者營養(yǎng)狀況和降低患者死亡率。結(jié)論內(nèi)固定、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)等術(shù)式和 MDT 新模式用于老年股骨頸骨折的治療均取得了顯著成果。
目的探討B(tài)MP-2體外誘導(dǎo)人跟腱來源肌腱干細胞(human Achilles tendon-derived stem cells,hATDSCs)成軟骨分化的作用。 方法無菌條件下取急性跟腱斷裂患者自愿捐贈的跟腱組織,膠原酶消化獲得有核細胞;以500個/cm2細胞密度接種,細胞貼壁呈克隆樣生長,混合培養(yǎng)獲得原代hATDSCs;體外傳代培養(yǎng)至第3代,流式細胞儀檢測hATDSCs免疫表型;油紅O染色、茜素紅染色及番紅O/快綠染色分別鑒定hATDSCs成脂、成骨及成軟骨分化能力。取第3代細胞體外三維培養(yǎng)成微球后分為兩組,實驗組用重組人BMP-2(recombinant human BMP-2,rhBMP-2)干預(yù),對照組不進行干預(yù)。3周后行微球大體觀察;組織學切片行HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察;實時熒光定量PCR檢測成軟骨特異性基因SOX9、Ⅱ型膠原和軟骨聚集蛋白多糖(Aggrecan)表達。 結(jié)果原代hATDSCs體外培養(yǎng)呈克隆樣集落生長;傳代后以紡錘形、成纖維樣細胞生長,形態(tài)均一。hATDSCs陽性表達MSCs特異性表面標志CD44、CD90、CD105,陰性表達CD34、 CD45和CD146。多向分化潛能鑒定示hATDSCs成脂誘導(dǎo)3周油紅O染色陽性,成骨誘導(dǎo)4周茜素紅染色陽性,成軟骨誘導(dǎo)3周番紅O/快綠染色陽性。rhBMP-2誘導(dǎo)hATDSCs 3周,實驗組微球形成,體積顯著大于對照組;HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色均呈陽性,實時熒光定量PCR檢測示SOX9、Ⅱ型膠原和Aggrecan mRNA表達顯著高于對照組(P lt; 0.05)。 結(jié)論體外BMP-2可促進hATDSCs成軟骨分化和蛋白聚糖合成增加,為研究慢性腱病組織病理學變化提供細胞生物學依據(jù)。
體外分離培養(yǎng)豬滑膜源性MSCs(synovium-derived MSCs,SMSCs),探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭,雌雄不限,體重8 ~ 10 kg。取豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養(yǎng),待第3 代SMSCs 長滿培養(yǎng)皿后,吸去基礎(chǔ)培養(yǎng)液,分別加入特定培養(yǎng)液進行成軟骨、成骨、成脂誘導(dǎo)分化,作為實驗組;以基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)作為對照組。成軟骨誘導(dǎo)21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色和實時熒光定量 PCR 檢測;成骨誘導(dǎo)10 d 后行ALP 染色檢測,21 d 后行茜素紅染色檢測;成脂誘導(dǎo)21 d 后行油紅O 染色檢測。 結(jié)果 SMSCs 培養(yǎng)24 h后細胞形態(tài)細長或呈多角形;48 h 后細胞數(shù)量增多;72 h 后可見大量紡錘形細胞,其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導(dǎo)21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性,細胞外有蛋白多糖(Aggrecan)形成;免疫組織化學染色示特異軟骨基質(zhì)Col Ⅱ表達;實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。成骨誘導(dǎo)10 d 后ALP 染色陽性,21d 后茜素紅染色陽性,有鈣結(jié)節(jié)形成。成脂誘導(dǎo)21 d 后油紅O 染色示細胞內(nèi)有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外,余染色均呈陰性。 結(jié)論 豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs,其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能,有望成為組織工程種子細胞來源。
構(gòu)建含人IL-1 受體拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra)逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體(PLXRNIL-1Ra),體外轉(zhuǎn)染人骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)軟骨細胞,研究其相關(guān)特性。 方法 利用細菌內(nèi)同源重組技術(shù)快速構(gòu)建PLXRN-IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒重組質(zhì)粒,經(jīng)測序及酶切鑒定正確后轉(zhuǎn)染PT67 細胞,包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒,并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組:未轉(zhuǎn)染組(A 組)、PLXRN 空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(B 組)、PLXRN-IL-1Ra 轉(zhuǎn)染組(C 組),病毒感染人OA 軟骨細胞后,RT-PCR 檢測細胞內(nèi)IL-1Ra 基因的轉(zhuǎn)錄和表達;ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結(jié)果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒中含有人IL-1Ra cDNA,測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養(yǎng)呈多角形或梭形,甲苯胺藍染色見細胞內(nèi)有紫色異染顆粒。RT-PCR 結(jié)果顯示在C 組出現(xiàn)311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段,A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶,GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發(fā)現(xiàn)C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達,蛋白濃度為(60.47 ± 15.13)ng/L,A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結(jié)論 構(gòu)建的IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞,并在體外獲得穩(wěn)定表達,為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據(jù)。
目的探討深低溫冷凍處理對大鼠髕腱組織中肌腱干細胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的成活、細胞活力、早期凋亡、遷移能力及肌腱相關(guān)基因表達的影響。方法取 12 只 4 月齡雄性 SD 大鼠雙側(cè)髕腱組織,其中 6 只大鼠 12 條髕腱組織(實驗組)進行深低溫冷凍處理;剩余髕腱組織(對照組)不作處理,作為正常對照。取兩組髕腱組織用 0.3% Ⅰ 型膠原酶消化獲得有核細胞,分別用錐蟲藍染色檢測有核細胞成活率、結(jié)晶紫染色檢測有核細胞克隆形成能力;取兩組髕腱組織分離培養(yǎng) TDSCs,并傳至第 3 代,采用 Alamar Blue 法檢測細胞體外增殖能力;Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測細胞早期凋亡率;Transwell 法檢測細胞遷移能力;實時熒光定量 PCR 檢測細胞肌腱相關(guān)基因 Ⅰ 型膠原(collagen type Ⅰ,Col1α1)、scleraxis(Scx)和 tenomodulin(Tnmd) mRNA 表達。結(jié)果與對照組(91.00%±3.63%)比較,實驗組原代有核細胞成活率為 61.65%±4.76%,差異有統(tǒng)計學意義(t=12.010,P=0.000)。兩組有核細胞接種后,均呈克隆樣生長;培養(yǎng) 12 d,實驗組每 1 000 個有核細胞克隆集落形成數(shù)為(8.41±0.33)個,較對照組(15.19±0.47)個顯著減少(t=28.910,P=0.000)。實驗組 TDSCs 占活性有核細胞比例為 1.37%±0.09%,較對照組 1.67%±0.10% 顯著減少(t=5.508,P=0.003)。第 3 代 TDSCs 培養(yǎng) 14 d 內(nèi)兩組細胞生長趨勢一致;兩組各時間點吸光度(A)值比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。實驗組及對照組 TDSCs 早期凋亡率分別為 1.67%±0.06%、1.63%±0.06%,比較差異無統(tǒng)計學意義(t=0.707,P=0.519)。鏡下見,兩組均有 TDSCs 黏附于 Transwell 小室下室,實驗組細胞數(shù)為(445.00±9.70)個,對照組為(451.50±12.66)個,比較差異無統(tǒng)計學意義(t=0.998,P=0.342)。實驗組 Col1α1、Scx、Tnmd 的 mRNA 相對表達量分別為 3.498±0.065、0.062±0.002、(4.211±0.211)×10–5,對照組分別為 3.499±0.113、0.062±0.001、(4.341±0.274)×10–5,比較差異均無統(tǒng)計學意義(t=0.013,P=0.991;t=0.042,P=0.969;t=0.653,P=0.549)。結(jié)論大鼠肌腱組織經(jīng)深低溫冷凍后其有核細胞成活率降低,但肌腱組織仍保留大量有活性 TDSCs,且細胞增殖能力、早期凋亡率、體外遷移能力及成肌腱分化能力未見明顯異常。
目的分析老年股骨頸骨折患者人工股骨頭置換術(shù)后死亡率及其危險因素。方法以 2011 年 1 月—2015 年 12 月因股骨頸骨折行人工股骨頭置換術(shù)患者為研究對象,將符合選擇標準的 109 例患者納入研究,收集臨床資料,包括年齡、性別、合并基礎(chǔ)疾病數(shù)量、入院至手術(shù)時間以及術(shù)前血紅蛋白、營養(yǎng)狀況。采用單因素分析和 Cox 比例風險回歸模型篩查術(shù)后死亡危險因素。結(jié)果術(shù)后 1 年和 2 年死亡率分別為 6.4%(7/109)和 17.4%(19/109)。單因素分析顯示年齡、術(shù)前血紅蛋白水平和營養(yǎng)狀況是患者術(shù)后死亡的影響因素(P<0.05)。多因素分析顯示,年齡≥80 歲和營養(yǎng)不良是患者術(shù)后死亡的獨立危險因素(P<0.05)。結(jié)論老年股骨頸骨折患者人工股骨頭置換術(shù)后死亡率高,對于此類患者,尤其是高齡和營養(yǎng)不良者,應(yīng)多學科綜合評估圍術(shù)期風險,加強圍手術(shù)期管理和優(yōu)化,以改善臨床預(yù)后。
目的 比較鎖定鋼板及髓內(nèi)釘治療老年肱骨近端Neer二、三部分骨折的療效。方法 回顧分析2015年1月—2018年12月符合選擇標準的86例肱骨近端Neer二、三部分骨折老年患者臨床資料。其中,46例行鎖定鋼板固定(鎖定鋼板組),40例行髓內(nèi)釘固定(髓內(nèi)釘)。兩組患者性別、年齡、致傷原因、骨折側(cè)別及分型、受傷至手術(shù)時間以及合并損傷等一般資料比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。比較兩組疼痛視覺模擬評分(VAS)、美國肩肘外科(ASES)評分、Constant-Murley評分,以及肩關(guān)節(jié)活動度(前屈、外展、外旋);X線片復(fù)查骨折愈合情況,于術(shù)后第2天及末次隨訪圖像測量頸干角并計算差值。結(jié)果 兩組患者均獲隨訪,隨訪時間18~40個月,平均30.4個月;兩組隨訪時間差異無統(tǒng)計學意義(t=?0.986,P=0.327)。X線片復(fù)查示兩組骨折均愈合,鎖定鋼板組骨折愈合時間為(11.3±2.1)周,髓內(nèi)釘組為(10.3±2.0)周,差異有統(tǒng)計學意義(t=2.250,P=0.027)。鎖定鋼板組頸干角差值為(7.63±7.01)°,髓內(nèi)釘組為(2.85±2.82)°,差異有統(tǒng)計學意義(t=4.032,P<0.001)。末次隨訪時,兩組Constant-Murley評分、ASES評分、VAS評分及肩關(guān)節(jié)活動度比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。鎖定鋼板組13例(28.3%)、髓內(nèi)釘組4例(10.0%)發(fā)生并發(fā)癥,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.498,P=0.034)。結(jié)論 鎖定鋼板及髓內(nèi)釘均可用于治療老年肱骨近端Neer二、三部分骨折,其中髓內(nèi)釘固定手術(shù)更加微創(chuàng),術(shù)后并發(fā)癥更少,骨折愈合更快。
目的綜述機器學習在創(chuàng)傷骨科領(lǐng)域的應(yīng)用進展并展望其在臨床中的應(yīng)用前景。方法廣泛查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻,闡述機器學習算法研究現(xiàn)狀,總結(jié)其在創(chuàng)傷骨科領(lǐng)域的研究進展。結(jié)果隨著計算機數(shù)據(jù)處理能力的飛速發(fā)展、醫(yī)工交叉的逐步深入,人工智能在醫(yī)學領(lǐng)域應(yīng)用漸廣。目前,機器學習在創(chuàng)傷骨科領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,在骨折影像識別與診斷分層、創(chuàng)傷骨科臨床決策及評估、圍術(shù)期與預(yù)后風險預(yù)測等方面,有著較強的性能和準確性。然而,機器學習的發(fā)展及臨床應(yīng)用仍存在著數(shù)據(jù)庫樣本不足、模型解釋性差以及普適性和個體化差異的問題。結(jié)論 隨著臨床樣本量的增加以及算法性能的提升,機器學習在創(chuàng)傷骨科輔助診斷、指導(dǎo)決策、制定個性化醫(yī)療方案以及合理配置臨床資源方面具有廣闊應(yīng)用前景。