目的 評(píng)價(jià)新型復(fù)合材料納米TCP/ 明膠/ 鹿茸多肽的生物相容性，為其在骨缺損修復(fù)領(lǐng)域中的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 制備納米TCP/ 明膠/ 鹿茸多肽復(fù)合材料，掃描電鏡觀察其形態(tài)。常規(guī)培養(yǎng)L929 和NIH/3T3 細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)等研究該復(fù)合材料的生物相容性。 結(jié)果 掃描電鏡觀察示復(fù)合材料微球直徑約10 μm，單個(gè)分散存在，微球表面存在納米級(jí)孔洞。急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在觀察期內(nèi)一般狀態(tài)良好，無(wú)驚厥、癱瘓和死亡等毒性反應(yīng)，給藥前、后體重?zé)o明顯變化，該復(fù)合材料無(wú)急性毒性。溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示溶血率均lt; 5%，符合醫(yī)用生物材料的溶血實(shí)驗(yàn)要求。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度材料浸提液作用于NIH/3T3 細(xì)胞均不同程度地促進(jìn)細(xì)胞增殖，具有較好的生物學(xué)活性。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該材料細(xì)胞毒性為0 級(jí)。 結(jié)論 納米TCP/ 明膠/ 鹿茸多肽復(fù)合材料具有良好的生物相容性。
目的 探討鹿茸多肽局部給藥和鹿茸多肽-PLGA 復(fù)合膜對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生的影響。 方法 制備厚度為50 μm、濃度分別為3 mg/g 及15 mg/g 的鹿茸多肽-PLGA復(fù)合膜。取3 ～ 6 月齡Wistar 大鼠72 只，雌雄不限，體重（250 ± 50） g，制備坐骨神經(jīng)切斷模型。模型制備后隨機(jī)分成4 組，每組18 只。A 組：吻合后不作任何處理；B組：術(shù)后每隔1 d 術(shù)側(cè)腓腸肌內(nèi)注射10 mg/L鹿茸多肽1 mL；C組：神經(jīng)吻合口部位包繞3 mg/g 鹿茸多肽-PLGA復(fù)合膜；D 組：神經(jīng)吻合口部位包繞15 mg/g 鹿茸多肽-PLGA 復(fù)合膜。術(shù)后第2、4 及6 周，大體觀察神經(jīng)斷端粘連情況，行電生理檢測(cè)、免疫組織化學(xué)染色及半定量分析、辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）逆行示蹤。 結(jié)果 術(shù)后各組大鼠行為無(wú)明顯異常，足底、足趾均無(wú)潰瘍；神經(jīng)吻合口處均無(wú)神經(jīng)瘤形成。術(shù)后2、4 及6 周，A 組神經(jīng)吻合處與周?chē)M織粘連明顯，B 組僅有輕度粘連，C、D 組無(wú)明顯粘連。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)小腿三頭肌誘發(fā)電位恢復(fù)率B、C、D 組明顯高于A組（P lt; 0.01），D 組優(yōu)于B 組和C 組（P lt; 0.05）；2、4 周B 組和C 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），6 周時(shí)C 組優(yōu)于B 組（P lt;0.05）。再生神經(jīng)纖維軸突及髓鞘TGF-β1、IGF 抗原染色：A 組輕度著色，B、C、D 組隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)著色逐漸加深。各時(shí)間點(diǎn)B、C、D 組TGF-β1、 IGF 抗原表達(dá)均較A 組高（P lt; 0.05）；術(shù)后6 周，D 組與B、C 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt;0.05），B、C 組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。HRP 逆行示蹤實(shí)驗(yàn)：隨時(shí)間延長(zhǎng)，被標(biāo)記的有髓神經(jīng)纖維逐漸增多，B、C、D 組標(biāo)記陽(yáng)性的有髓神經(jīng)纖維數(shù)明顯高于A 組，D 組高于其他組，B 組和C 組差異不明顯。 結(jié)論 鹿茸多肽局部應(yīng)用和鹿茸多肽-PLGA 復(fù)合膜包繞神經(jīng)吻合口周?chē)鷮?duì)神經(jīng)再生均有促進(jìn)作用，此作用與鹿茸多肽有明顯量效關(guān)系，鹿茸多肽-PLGA 復(fù)合膜有預(yù)防神經(jīng)粘連作用。
目的 通過(guò)觀察鹿茸多肽對(duì)白細(xì)胞介素 1β（interleukin 1β，IL-1β）誘導(dǎo)軟骨表型化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）凋亡的影響，以優(yōu)化軟骨組織工程的種子細(xì)胞。方法 新西蘭大白兔2只，抽取其骨髓；經(jīng)密度梯度離心得到單核細(xì)胞，經(jīng)體外分離、培養(yǎng)獲得兔MSCs。用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）將其誘導(dǎo)分化軟骨表型。將軟骨表型化MSCs隨機(jī)分成A組（空白對(duì)照組）：5%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液；B組（IL-1β組）：5%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液加入100 ng IL-1β；C組（鹿茸多肽組）：5%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液加入10 μg/ml鹿茸多肽作用3d后再加入100 ng IL-1β；D組（TGF-β1組）：5%胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)液加10 ng/ml TGF-β1作用3 d后再加入100 ng IL-1β。分別于培養(yǎng)24、48和72 h后取樣，采用透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，Annexin V法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，RT-PCR技術(shù)分析Caspase-3 mRNA表達(dá)水平，ELISA法檢測(cè)Caspase-3蛋白酶活性。結(jié)果 透射電鏡觀察：B組24 h后細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)開(kāi)始呈塊狀凝集，分布于核膜下，核膜不規(guī)則；48 h后細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)凝集加劇；72 h后部分細(xì)胞內(nèi)的核碎片凝集成凋亡小體。各時(shí)間點(diǎn)C、D組細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變相對(duì)滯后，且數(shù)量較少；A組細(xì)胞結(jié)構(gòu)幾乎無(wú)明顯改變。各時(shí)間點(diǎn)B組MSCs凋亡率、Caspase-3 mRNA表達(dá)及蛋白酶活性逐漸增高，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）；C、D組與B組比較則逐漸下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。結(jié)論 Caspase3參與MSCs凋亡，鹿茸多肽通過(guò)減少Caspase-3 mRNA表達(dá)，并抑制其蛋白酶活性，阻止或逆轉(zhuǎn)軟骨表型化MSCs凋亡。