目的探討B(tài)7CD28/細胞毒T淋巴細胞相關(guān)蛋白4（CTLA4）共刺激通路在胰島移植中的重要作用。方法采用文獻回顧的方法對該共刺激通路的分子結(jié)構(gòu)、功能以及有關(guān)動物實驗的資料進行綜述。結(jié)果B7CD28/CTLA4共刺激通路是T淋巴細胞活化、增殖的信號傳導通路之一，若缺乏共刺激信號，則會導致T淋巴細胞呈克隆無反應狀態(tài)。CTLA4Ig通過阻斷CD28介導的共刺激通路，使胰島移植物在受者體內(nèi)長期存活。結(jié)論通過對B7CD28/CTLA4共刺激通路的研究，有助于了解移植胰島存活的免疫機理。
目的構(gòu)建含抗腫瘤相關(guān)抗原TAG72單鏈抗體及CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)融合基因的哺乳細胞表達載體，為制備消化道腫瘤靶向性嵌合錨定T細胞，并探討其對消化道腫瘤的殺傷活性。方法應用PCR法，將抗TAG72單鏈抗體(single chain variable fragment,scFv)克隆入哺乳細胞表達載體pcDNA3.0，在5′端及3′端分別引入相應酶切位點； 用RTPCR法從正常人外周血T細胞克隆CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)的cDNA，然后將其克隆于scFv的下游，并在5′端及3′端引入相應的酶切位點。結(jié)果抗TAG-72 scFv cDNA片段為729 bp，與已知的序列相符； CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)的cDNA片段為240 bp，與Genebank公布的序列一致。重組的表達載體經(jīng)酶切瓊脂糖電泳測序加以證實。結(jié)論完成了抗腫瘤相關(guān)抗原TAG72 scFv及CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)融合基因scFvCD28pcDNA3.0的構(gòu)建，為制備消化道腫瘤靶向性嵌合錨定T細胞奠定了實驗基礎(chǔ)。
為探討CD28單克隆抗體在移植免疫中的作用，以混合淋巴細胞培養(yǎng)和大鼠同種異體甲狀旁腺移植為模型，觀察mAbCD28在體外和體內(nèi)實驗中的作用。結(jié)果：mAbCD28在體外可以抑制淋巴細胞的增殖，在體內(nèi)可以延長甲狀旁腺移植物的存活時間。本實驗結(jié)果提示：mAbCD28可以阻斷CD28-B7之間共刺激信號的傳遞，并在同種異體大鼠甲狀旁腺移植中起到免疫抑制作用。
目的 構(gòu)建含有由抗腫瘤相關(guān)糖蛋白72(anti-TAG72)單鏈抗體片段(single chain variable fragment,scFv)及CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)的融合基因anti-TAG72 scFv-CD28的重組綠色熒光表達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28，并轉(zhuǎn)染獲得嵌合錨定T淋巴細胞。方法 將anti-TAG72單鏈抗體及CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)基因的嵌合錨定融合分子克隆入綠色熒光蛋白真核表達載體pEGFP-C3，獲得pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28表達載體。用卡那霉素篩選陽性克隆，經(jīng)酶切和測序鑒定。將上述重組質(zhì)粒pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28以脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染外周血單核細胞(PBMC)，以獲得嵌合錨定T淋巴細胞，用熒光顯微鏡檢測嵌合分子anti-TAG72 scFv-CD28在PBMC中的表達，并檢驗嵌合錨定融合分子anti-TAG72 scFv-CD28的表達。結(jié)果 重組綠色熒光表達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28中anti-TAG72 scFv-CD28片段為1 002 bp，與已知的序列相符。酶切、測序結(jié)果表明，嵌合錨定融合分子基因片段anti-TAG72 scFv-CD28被正確插入pEGFP-C3載體； 轉(zhuǎn)染后anti-TAG72 scFv-CD28片段及綠色熒光物質(zhì)表達于嵌合錨定T淋巴細胞胞膜表面及胞漿中，為綠色熒光顯色。結(jié)論 完成了綠色熒光表達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28的構(gòu)建，并成功在PBMC瞬時表達。