目的 構建nesprin蛋白siRNA慢病毒載體（LV-siNesprin），感染骨髓間充質干細胞（MSCs），觀察nesprin蛋白對MSCs的影響。 方法 針對nesprin靶基因序列設計并合成4對miRNA oligo，并將4對oligo退火成雙鏈DNA，測序鑒定。將4種miRNA干擾質粒（SR-1、SR-2、SR-3、SR-4）轉入大鼠血管平滑肌細胞，用反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）和蛋白印跡法（Western blotting）檢測干擾效應，篩選最佳干擾序列；將最佳干擾序列和pDONR221載體進行重組反應，獲得含干擾序列的入門載體，再將入門載體和慢病毒表達的目的載體pLenti6/V5-DEST進行重組反應獲得含干擾序列的LV-siNesprin＋綠色熒光蛋白（GFP），包裝慢病毒，測定病毒滴度。LV-siNesprin＋GFP轉染MSCs，Western blotting鑒定比較nesprin蛋白表達情況（分為LV-siNesprin＋GFP組、GFP對照組和正常細胞組），用4，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色觀察細胞核形態(tài)改變和四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測MSCs感染LV-siNesprin后24 h、48 h、72 h和96 h的增殖情況（分為LV-siNesprin＋GFP組、GFP對照組和正常細胞組）?！〗Y果 測序證實合成的4對miRNA oligo正確，RT-PCR和Western blotting篩選出最佳干擾miRNA質粒SR-3，成功構建LV-siNesprin，包裝慢病毒，病毒懸液的活性滴度為1×106 ifu/ml。LV-siNesprin轉染MSCs后，nesprin蛋白表達明顯下降，出現(xiàn)細胞核融合、核碎裂等形態(tài)學改變；MTT法檢測顯示，LV-siNesprin＋GFP組MSCs增殖速度較GFP對照組和正常細胞組減慢?！〗Y論 Nesprin蛋白對MSCs核膜穩(wěn)定維持核膜空間結構起作用，并利于細胞增殖更新。