目的 探討槐耳清膏在體外對人直腸癌HR8348細(xì)胞的生長抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用及其作用機(jī)理。方法 將處于對數(shù)生長期的HR8348細(xì)胞用含槐耳清膏的培養(yǎng)基培養(yǎng)36 h,用四氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測吸光度(OD)值,計(jì)算抑制率; 用甲基綠-派若寧染色法及TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡指數(shù); 用免疫組織化學(xué)方法檢測bcl-2、bcl-xl、bax、bak及p53基因表達(dá)的情況。結(jié)果 槐耳清膏對HR8348細(xì)胞的抑制率隨濃度增加而上升,濃度為4.0 mg/ml時(shí)抑制率最大(71.1%),與5-FU組(濃度為10 μg/ml)相比差異無顯著性意義(P>0.05)。甲基綠-派若寧染色法和TUNEL法均可見到典型的細(xì)胞凋亡、凋亡小體或出泡現(xiàn)象,凋亡指數(shù)隨槐耳清膏濃度的增加而增加,當(dāng)濃度達(dá)4.0 mg/ml時(shí),凋亡指數(shù)迅速上升,甲基綠-派若寧法為0.1620±0.0128,TUNEL法為0.2612±0.0158,均大于5-FU組的凋亡指數(shù)(0.0780±0.0095和0.1028±0.0131),P<0.05?;倍甯嘟Mbcl2、bclxl、bak、p53蛋白表達(dá)較空白對照組明顯增強(qiáng)(P<0.05),而bax變化不明顯(P>0.05)。槐耳清膏組bak/bcl-2 和bak/bcl-xl比值顯著大于空白對照組。結(jié)論 槐耳清膏在體外對人直腸癌HR8348細(xì)胞具有顯著的抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用?;倍甯嗾T導(dǎo)人直腸癌HR8348細(xì)胞凋亡可能與提高bak/bcl-2、bak/bcl-xl比值及上調(diào)p53基因表達(dá)有關(guān)。
目的 探討5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)體外誘導(dǎo)直腸癌HR8348細(xì)胞凋亡的作用及細(xì)胞凋亡與bcl-2、bcl-xl、bax及p53表達(dá)的關(guān)系。方法 經(jīng)5-FU處理HR8348細(xì)胞24 h后,用甲基綠-派若寧染色法和TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況,并用SP免疫組織化學(xué)法檢測HR8348細(xì)胞中bcl-2、bcl-xl、bax和p53的表達(dá)。結(jié)果 HR8348細(xì)胞經(jīng)5-FU作用24 h后,細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)明顯高于對照組,差異有顯著性意義(P<0.01)。5-FU作用不同時(shí)相bcl-2的表達(dá)評分結(jié)果與對照組比較差異均無顯著性意義; 不同時(shí)相bcl-xl的表達(dá)評分結(jié)果與對照組比較稍降低; 而bax的表達(dá)評分結(jié)果隨時(shí)間延長明顯增加,24 h、36 h的表達(dá)評分結(jié)果明顯高于對照組(P<0.01),而p53在5-FU組和對照組各時(shí)相均未見表達(dá)。結(jié)論 5-FU具有誘導(dǎo)HR8348細(xì)胞凋亡的作用; 5-FU可能通過上調(diào)bax的表達(dá)并改變bax/bcl-xl的比值而誘導(dǎo)HR8348細(xì)胞凋亡。