目的 觀察癌胚抗原（CEA）陽性靶向性淋巴細胞對胃癌細胞體內(nèi)及體外靶向性治療作用。 方法 從健康人外周血中分離單個核細胞（PBMC），通過脂質(zhì)體lipofectamine 2000 介導的細胞轉(zhuǎn)染將重組真核表達載體 anti-CEA-scFv-CD3ζ-pcDNA3.0 介導的細胞轉(zhuǎn)染導入 PBMC，以獲取 CEA 陽性靶向性淋巴細胞（以下簡稱靶淋巴細胞）；將不含 anti-CEA-scFv-CD3ζ-pcDNA3.0 融合基因片段的 pcDNA3.0 真核表達載體轉(zhuǎn)染入 PBMC，獲取的淋巴細胞簡稱為空載體淋巴細胞。將上述兩種淋巴細胞分別與 CEA 陽性 KATOⅢ胃癌細胞和 CEA 陰性 BGC-823 胃癌細胞共培養(yǎng)，觀察不同靶淋巴細胞與胃癌細胞共培養(yǎng)（24 h 或 36 h ）后的識別情況或其對胃癌細胞凋亡的影響。并將上述已獲取的兩種淋巴細胞分別通過尾靜脈注入荷 CEA 陽性 KATOⅢ胃癌細胞裸鼠和荷 CEA 陰性 BGC-823 胃癌細胞裸鼠體內(nèi)，以觀察其對荷胃癌裸鼠腫瘤生長情況的影響。 結(jié)果 ① 靶淋巴細胞與胃癌細胞共培養(yǎng) 24 h 時，靶淋巴細胞對 KATOⅢ胃癌細胞的識別率為 72.3%，淋巴細胞對 KATOⅢ胃癌細胞的識別能力較強；其對 BGC-823 胃癌細胞識別率為 7.8%，其對 BGC-823 胃癌細胞識別能力較弱。② 當靶淋巴細胞、空載體淋巴細胞分別與 KATOⅢ和 BGC-823 胃癌細胞分別共培養(yǎng) 36 h 時，靶淋巴細胞+KATOⅢ胃癌細胞組的凋亡率明顯高于空載體淋巴細胞+KATOⅢ胃癌細胞組（P=0.032），而靶淋巴細胞+BGC-823 胃癌細胞組和空載體淋巴細胞+BGC-823 胃癌細胞組的凋亡率比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.118）。③ 在觀察 40 d 內(nèi)，靶淋巴細胞+KATOⅢ胃癌細胞組的腫瘤體積明顯小于空載體淋巴細胞+KATOⅢ胃癌細胞組（F=5.010，P<0.01）和空白對照組（F=7.560，P<0.01）；靶淋巴細胞+BGC-823 胃癌細胞組與空載體淋巴細胞+BGC-823 胃癌細胞組間比較差異無統(tǒng)計學意義（F=1.210，P>0.05）。靶淋巴細胞+KATOⅢ胃癌細胞組的腫瘤體積明顯小于靶淋巴細胞+BGC-823 胃癌細胞組（F=4.982，P<0.01）。 結(jié)論 CEA 陽性靶向性淋巴細胞可特異性促進 CEA 陽性胃癌細胞凋亡，抑制荷 CEA 陽性胃癌細胞裸鼠腫瘤的生長。
目的 制備腫瘤相關糖蛋白-72抗原（TAG-72）嵌合錨定T細胞，通過體外實驗檢測其對乳腺癌細胞的抑癌活性。方法 分離健康人外周血單個核細胞（PBMC），采用脂質(zhì)體lipofectamineTM 2000介導的細胞瞬時轉(zhuǎn)染方法，將已制備的重組真核表達載體即抗TAG-72-scFv-CD3ζ-pcDNA 3.0導入PBMC，以獲得TAG-72嵌合錨定T細胞，以此為轉(zhuǎn)染組；用轉(zhuǎn)染空載體pcDNA 3.0的PBMC作為對照組。將轉(zhuǎn)染組嵌合錨定T細胞和對照組PBMC細胞分別與乳腺癌細胞系MCF-7及Bcap37共培養(yǎng)，觀察兩者對乳腺癌細胞G1期的阻滯率。結(jié)果 轉(zhuǎn)染組對MCF-7細胞系的G1期阻滯率為（82.3±6.9）%，對照組為（43.4±3.9）%，2組間比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；轉(zhuǎn)染組對Bcap37細胞系的G1期阻滯率為（51.3±4.7）%，對照組為（45.6±2.5）%，2組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論 TAG-72嵌合錨定T細胞可特異性地抑制TAG-72＋乳腺癌細胞的增殖，此將為乳腺癌的臨床診治提供一種有希望的途徑。
目的探討腫瘤相關糖蛋白72(TAG72)靶向性嵌合錨定T淋巴細胞的制備方法，并檢測它對TAG72陽性肝癌細胞增殖的阻滯效應。方法分離外周血單核細胞(PBMC)，然后用免疫磁珠法分離得到CD8+ T淋巴細胞。將重組真核表達載體anti-TAG72-scFv-CD28-pcDNA3.0采用脂質(zhì)體介導的細胞轉(zhuǎn)染和細胞培養(yǎng)，以制備TAG72靶向性的嵌合錨定T淋巴細胞; 將嵌合錨定T淋巴細胞與TAG72陽性肝癌細胞SMMC7721共培養(yǎng)，通過流式細胞儀檢測肝癌細胞的周期變化，分析嵌合錨定T淋巴細胞對肝癌細胞增殖的抑制效應。結(jié)果TAG72靶向性嵌合錨定T淋巴細胞可識別肝癌細胞SMMC7721； 用流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，嵌合錨定T淋巴細胞可引起肝癌細胞SMMC7721的增殖阻滯。結(jié)論TAG72靶向性嵌合錨定T淋巴細胞可特異性識別TAG72陽性肝癌細胞SMMC7721并引起其增殖阻滯。
目的 構建含有由抗腫瘤相關糖蛋白72(anti-TAG72)單鏈抗體片段(single chain variable fragment,scFv)及CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)的融合基因anti-TAG72 scFv-CD28的重組綠色熒光表達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28，并轉(zhuǎn)染獲得嵌合錨定T淋巴細胞。方法 將anti-TAG72單鏈抗體及CD28胞內(nèi)區(qū)及跨膜區(qū)基因的嵌合錨定融合分子克隆入綠色熒光蛋白真核表達載體pEGFP-C3，獲得pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28表達載體。用卡那霉素篩選陽性克隆，經(jīng)酶切和測序鑒定。將上述重組質(zhì)粒pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28以脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染外周血單核細胞(PBMC)，以獲得嵌合錨定T淋巴細胞，用熒光顯微鏡檢測嵌合分子anti-TAG72 scFv-CD28在PBMC中的表達，并檢驗嵌合錨定融合分子anti-TAG72 scFv-CD28的表達。結(jié)果 重組綠色熒光表達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28中anti-TAG72 scFv-CD28片段為1 002 bp，與已知的序列相符。酶切、測序結(jié)果表明，嵌合錨定融合分子基因片段anti-TAG72 scFv-CD28被正確插入pEGFP-C3載體； 轉(zhuǎn)染后anti-TAG72 scFv-CD28片段及綠色熒光物質(zhì)表達于嵌合錨定T淋巴細胞胞膜表面及胞漿中，為綠色熒光顯色。結(jié)論 完成了綠色熒光表達載體pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28的構建，并成功在PBMC瞬時表達。
目的 探討抗腫瘤相關糖蛋白-72(TAG-72)單鏈抗體的原核表達及與4種肝癌細胞系和肝癌組織的特異性親和力。方法 將抗TAG-72單鏈抗體的cDNA片段插入噬菌粒載體pCANTAB5E, 獲得噬菌粒載體TAG-72-scFv-pCANTAB5E。將后者轉(zhuǎn)化入E.coli HB2151, 經(jīng)β, D異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達獲得抗TAG-72單鏈抗體蛋白。采用細胞培養(yǎng)及免疫細胞/組織化學方法, 檢測4種肝癌細胞系及石蠟包埋的肝癌組織中TAG-72抗原的表達。結(jié)果 SDS-PAGE及Western blot法證實, 抗TAG-72單鏈抗體蛋白分子得以正確表達?？筎AG-72單鏈抗體可與肝癌細胞系SMMC7721、HepG2和HHCC結(jié)合, 表明這3種細胞表達了特異性腫瘤抗原; 抗TAG-72單鏈抗體不能結(jié)合BEL7402細胞。40例肝癌組織中TAG-72抗原表達陽性率Ⅰ期、Ⅱ~Ⅲ期分別為23.08%(3/13)和62.96%(17/27),在正常肝組織標本中無TAG-72抗原表達,TAG-72抗原在正常肝組織及肝癌組織中表達的差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。結(jié)論 TAG-72抗原在肝癌細胞或肝癌組織中有特異性表達，有可能成為判斷肝癌的標志物。
目的探討芒果苷對大鼠急性脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）的保護作用并分析其相關機制。 方法成年雄性SD大鼠90只，體質(zhì)量250～300 g，隨機分為假手術組（A組）、SCI組（B組）、10 mg/kg芒果苷處理組（C組）、25 mg/kg芒果苷處理組（D組）、50 mg/kg芒果苷處理組（E組），每組18只。B、C、D、E組采用Allen法（60 g/cm）建立大鼠T9 SCI模型，A組僅切除T8～10椎板；C、D、E組術后每天按照10、25、50 mg/kg劑量腹腔注射芒果苷，共注射30 d；A、B組于對應時間點注射等量生理鹽水。術后觀察大鼠存活情況，于24、48、72 h采用BBB評分評價大鼠后肢運動功能；72 h時取損傷節(jié)段脊髓測量其水含量，ELISA檢測氧化應激反應因子丙二醛（malondialdehyde，MDA）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、過氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH）以及炎性因子NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6活性；30 d時取損傷節(jié)段脊髓采用ELISA法檢測Caspase-3、9活性，Western blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2表達，組織學觀察脊髓組織形態(tài)，免疫組織化學染色觀察Caspase-3蛋白表達。 結(jié)果術后各組大鼠均存活至實驗結(jié)束。B、C、D、E組BBB評分均顯著低于A組，B、C、D、E組評分呈逐漸增高趨勢，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。B、C、D、E組脊髓水含量均顯著高于A組，B、C、D、E組水含量呈逐漸降低趨勢，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。ELISA檢測示，B、C、D、E組MDA、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、Caspase-3、Caspase-9活性均顯著高于A組，B、C、D、E組均呈逐漸降低趨勢；而CAT、SOD、GSH活性均顯著低于A組，B、C、D、E組均呈逐漸增加趨勢；以上指標組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Western blot示，B、C、D、E組Bax蛋白表達明顯高于A組，B、C、D、E組表達呈逐漸降低趨勢；Bcl-2蛋白表達明顯低于A組，B、C、D、E組表達呈逐漸增高趨勢；組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。組織學觀察示B組脊髓組織符合SCI病理改變，C、D、E組神經(jīng)壞死程度較B組好轉(zhuǎn)，并且E組效果優(yōu)于D組，D組優(yōu)于C組。免疫組織化學染色觀察，B、C、D、E組Caspase-3蛋白表達量顯著高于A組，B、C、D、E組呈逐漸降低趨勢（P＜0.05）。 結(jié)論對于大鼠急性SCI，芒果苷可通過減輕脊髓組織水腫、抑制氧化應激反應及炎性反應，調(diào)節(jié)Bax、Bcl-2蛋白表達，從而發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
目的 構建受甲胎蛋白（AFP）增強子和白蛋白（Alb）啟動子調(diào)控的含有血管抑制素（angiostatin）K5序列的真核表達載體，通過基因轉(zhuǎn)染，將angiostatin K5基因?qū)敫伟┘毎?，觀察angiostatin K5的表達。方法 用RTPCR法從正常人真核細胞擴增出angiostatin K5基因，將AFP增強子和Alb啟動子調(diào)控序列定向克隆入真核表達載體pcDNA3.1，并將angiostatin K5 cDNA置于上述調(diào)控序列之下，從而構建得到重組真核表達載體pcDNA3.1AFABangiostatin K5His。利用細胞培養(yǎng)、脂質(zhì)體介導的細胞轉(zhuǎn)染，將angiostatin K5基因?qū)敫伟┘毎＠肧DSPAGE和Western blot法檢測肝癌細胞中angiostatin K5的表達。結(jié)果 通過酶切鑒定及DNA測序證實目的真核表達載體pcDNA3.1AFABangiostatin K5His與預期的結(jié)果相同。SDSPAGE及Western blot分析證明，angiostatin K5在肝癌細胞中得以表達。結(jié)論 構建的肝癌特異性重組真核表達載體可增加對AFP陽性肝癌細胞的治療的特異性，并用于實現(xiàn)對肝癌的特異性血管抑制作用。
目的 比較胃腸道漿肌層吻合、黏膜外吻合、一層吻合和二層吻合對吻合愈合的影響。方法 家兔分成4組，即漿肌層吻合組、二層吻合組、一層吻合組和黏膜外吻合組。每組10只，每只動物行1個胃十二指腸側(cè)側(cè)吻合、2個回腸端端吻合和2個結(jié)腸端端吻合。術后第3和7 d，每組分別各取5只動物，測定吻合破裂壓（ABP）、組織羥脯氨酸（HP）含量并做病理檢查。結(jié)果 術后第3 d，各組ABP間差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。術后第7 d， 二層吻合、一層吻合和黏膜外吻合的ABP間差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)； 胃十二指腸漿肌層吻合的ABP高于二層吻合和一層吻合（P＜0.05）； 回腸漿肌層吻合的ABP高于二層吻合（P＜0.01）； 結(jié)腸漿肌層吻合的ABP高于二層吻合、一層吻合和黏膜外吻合（P＜0.05）。術后第3 d，胃十二指腸和回腸吻合的各組HP含量無明顯差異，結(jié)腸二層吻合HP含量高于一層吻合（P＜0.05）； 術后第7 d回腸、結(jié)腸吻合的各組HP含量差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)， 胃十二指腸漿肌層吻合HP含量高于二層吻合（P＜0.025）。術后第3 d，胃十二指腸和回腸吻合的各組炎癥程度相似，結(jié)腸黏膜外吻合的炎癥反應輕于二層吻合（P＜0.05）； 術后第7 d，胃十二指腸和結(jié)腸吻合的各組炎癥程度相似，回腸漿肌層吻合炎癥反應輕于二層吻合（P＜0.05）。術后第7 d，胃腸道吻合各組黏膜愈合指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。結(jié)論 胃腸道漿肌層吻合和其他手工吻合一樣安全可靠，但更加簡便。