目的 長段輸尿管狹窄或缺損的修復(fù)是泌尿外科棘手問題,將犬自體膀胱黏膜移植于漿肌層腸段重建輸尿管,探討其作為尿路替代材料重建輸尿管的可行性。 方法 成年比格犬12 條,體重6.5 ~ 9.3 kg,雌雄不限,根據(jù)重建輸尿管部位不同將其隨機(jī)分成A、B、C 組(n=4)。A 組:自體膀胱黏膜移植于漿肌層腸段后包縫于人工輸尿管支架制備人工輸尿管,重建8 cm 長下段輸尿管,將人工輸尿管近端與上段輸尿管斷端吻合,遠(yuǎn)端與膀胱吻合。B 組:同A 組方法重建8 cm 長上段輸尿管,將人工輸尿管近端與腎盂吻合,遠(yuǎn)端與下段輸尿管斷端吻合。C 組:同A 組方法重建全段16 cm 長輸尿管,將人工輸尿管近端與腎盂吻合,遠(yuǎn)端與膀胱吻合。術(shù)前各組犬取血行腎功及電解質(zhì)檢測;術(shù)后觀察犬的一般情況及支架管和造瘺管的引流、手術(shù)切口的愈合、并發(fā)癥的發(fā)生等情況。術(shù)后第6 周行生化指標(biāo)復(fù)查及靜脈尿路造影(intravenous urography,IVU)檢查后,對人工輸尿管行大體及組織學(xué)觀察。 結(jié)果 B 組1 條犬術(shù)后2 d 因輸尿管支架脫出,術(shù)后發(fā)生尿瘺及傷口感染,排除實(shí)驗(yàn);其余犬術(shù)后均無并發(fā)癥發(fā)生。術(shù)后第6 周各組犬腎功和電解質(zhì)檢測與術(shù)前比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。IVU 顯示:A 組1 條犬術(shù)側(cè)腎臟積水、上段輸尿管擴(kuò)張,B 組1 條犬人工輸尿管與下段輸尿管吻合口狹窄、同側(cè)腎臟積水;其余各組犬術(shù)側(cè)腎臟功能良好,人工輸尿管有蠕動功能。組織病理學(xué)觀察示術(shù)后第6 周3 組人工輸尿管組織結(jié)構(gòu)與正常輸尿管相似,其中A、C 組各1 條犬出現(xiàn)人工輸尿管炎癥。 結(jié)論 自體膀胱黏膜移植于漿肌層腸段重建犬輸尿管,可形成組織結(jié)構(gòu)與正常輸尿管相似的人工輸尿管,且功能良好。
目的 探討兔口腔黏膜細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法,并以其為種子細(xì)胞與異體膀胱黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)(bladder acellular matrix graft,BAMG)復(fù)合,構(gòu)建組織工程尿道。 方法 18 只10 周齡雄性新西蘭大耳白兔,體重0.3 ~ 0.5 kg。取其中12 只兔口腔黏膜組織,分離獲得口腔黏膜細(xì)胞。將口腔黏膜細(xì)胞分別接種于有3T3 細(xì)胞及無3T3細(xì)胞的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng),接種后第2 天于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,繪制細(xì)胞生長曲線,觀察生長增殖情況,并行免疫熒光組織化學(xué)染色鑒定。取余6 只兔膀胱,經(jīng)脫細(xì)胞處理制備BAMG,隨機(jī)取1 cm × 1 cm 組織行HE 染色,觀察脫細(xì)胞效果。將接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)獲得的第2 代口腔黏膜細(xì)胞種植于BAMG 上,培養(yǎng)1 周后,行HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 的復(fù)合狀況。 結(jié)果 倒置相差顯微鏡下觀察,接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞可傳至7 ~ 8 代,其細(xì)胞形態(tài)均一,功能良好;無3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞形態(tài)多樣,傳至第2 代時,即開始出現(xiàn)老化。細(xì)胞生長曲線顯示,兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞均于第8 天開始呈對數(shù)增長,第14 天達(dá)峰值。接種于有3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞,培養(yǎng)至融合時所獲得細(xì)胞數(shù)量明顯多于接種于無3T3 細(xì)胞培養(yǎng)皿的口腔黏膜細(xì)胞。兩種方法培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞行免疫熒光染色,均呈綠色熒光。HE 染色觀察,BAMG 經(jīng)脫細(xì)胞處理后未見細(xì)胞,脫細(xì)胞效果良好。復(fù)合培養(yǎng)1 周后,HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細(xì)胞與BAMG 復(fù)合良好。 結(jié)論 兔口腔黏膜細(xì)胞可在體外成功培養(yǎng)、擴(kuò)增,與同種異體BAMG 復(fù)合后生長良好,為構(gòu)建組織工程尿道提供了一種新的選擇。
目的 探討無細(xì)胞膀胱黏膜下基質(zhì)(acellular urinary bladder submucosa, AUBS)的生物相容性。方法 應(yīng)用反復(fù)凍融-酶消化處理及冷凍干燥技術(shù)制備人AUBS。體外培養(yǎng)人口腔黏膜細(xì)胞,以2×106/ml密度接種于AUBS,觀察細(xì)胞生長和增殖情況。取純種SD大鼠18只,雌雄不限,體重250~300 g。將AUBS 1 cm×1 cm移植于大鼠腹部肌肉內(nèi),分別于術(shù)后3、6、10、14、21和28 d各處死3只動物并取材進(jìn)行組織學(xué)觀察。結(jié)果 AUBS主要由膠原纖維構(gòu)成,呈三維立體網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)。第2代人口腔黏膜細(xì)胞接種于AUBS后能夠生長和繁殖,10 d后在AUBS表面形成了連續(xù)單層細(xì)胞結(jié)構(gòu)。AUBS植入大鼠腹部肌肉內(nèi),術(shù)后6 d AUBS移植區(qū)可見組織細(xì)胞浸潤、生長,14 d可見新生血管形成,28 d膠原纖維排列規(guī)則。結(jié)論 AUBS可以在體內(nèi)、體外誘導(dǎo)細(xì)胞黏附和生長,生物相容性良好。
目的 探討膀胱黏膜尿道成形術(shù)一期治療尿道下裂的療效。方法 1991年8月~2003年8月對38例先天性尿道下裂患者陰莖下曲矯正后行一期膀胱黏膜尿道成形術(shù)治療。結(jié)果 38例均一期成形,術(shù)后隨訪6個月~9年,尿道外口修復(fù)至正常陰莖頭位置,達(dá)到外觀美觀,恢復(fù)正常排尿。其中2例一期手術(shù)失敗,二期再行膀胱黏膜尿道成形術(shù)仍獲得成功。一期手術(shù)成功率為95%,術(shù)后3例尿瘺再行尿瘺修補(bǔ)術(shù),2例輕度尿道狹窄,經(jīng)尿道擴(kuò)張后解除。余無并發(fā)癥。結(jié)論 一期膀胱黏膜尿道成形術(shù)治療尿道下裂具有并發(fā)癥少,成功率高等優(yōu)點(diǎn)。