摘要:目的:動(dòng)態(tài)觀察大鼠腦出血后血腫周?chē)M織補(bǔ)體激活與細(xì)胞凋亡的規(guī)律。方法:用膠原酶注入到大鼠尾狀核的方法制作腦出血模型。將大鼠分為腦出血、假手術(shù)組、正常組3組。采用蘇木素伊紅(HE) 染色、免疫組織化學(xué)染色及原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)分別觀察各組在腦出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d時(shí)血腫周?chē)a(bǔ)體C3、促凋亡基因(Bax)、抑凋亡基因(Bclxl)及TUNEL的表達(dá)。結(jié)果補(bǔ)體C3的表達(dá)峰值在24~48 h;TUNEL、Bax蛋白表達(dá)術(shù)后12h增加,48~72 h達(dá)高峰,而B(niǎo)clxl蛋白表達(dá)高峰在48h。結(jié)論:大鼠腦出血后血腫周?chē)M織補(bǔ)體C3的表達(dá)增加與細(xì)胞凋亡的演變趨勢(shì)一致,C3與凋亡有相關(guān)。Abstract: Objective: To study the complement activation and apoptosis regular genes changes in the tissues of the perihematoma of intracerebral hemorrhage (ICH) in rats. Methods: Intracerebral hemorrhage was induced in rats by injection of bacterial collagenase into the caudate nucleus. Histopathological changes were studied in 6 h,12 h, 24 h, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d after the injection. The immunohistochemistry and TUNEL analysis were performed. The expression of complement factor C3, the TUNELpositive cells, the proapoptotic gene expression (Bax) and the antiapoptotic gene (Bclxl) were examined. Results: The expression of C3 increased to its maximum between 2448 h. The TUNELpositive cells and Bax protein expression increased gradually and reached the peak level between 4872 h. The Bclxl protein reached the peak level at 48 h. The correlation analysis showed that the quantity of C3 was positively related to that of the TUNELpositive cells, but the bax protein was not related to Bclxl protein. Conclusion: The expression of complement factor C3 may contributes to the nerve injury after cerebral hemorrhage and relate to the apotosis in the tissues surrounding the hametoma in rats.
摘要:目的:探討卡配因抑制劑3（MDL28170）對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。方法:建立新生SD大鼠HIBD模型,治療組于缺養(yǎng)缺血后即刻、2 h、4 h腹腔內(nèi)注射MDL28170,對(duì)照組及手術(shù)組同時(shí)予生理鹽水。缺氧缺血后24 h用免疫組化方法觀察大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3 蛋白表達(dá)、TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,觀察組織病理改變并計(jì)算海馬神經(jīng)元死亡數(shù),透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果:缺氧缺血后24 h缺血側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)Caspase3和TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯增加,透射電鏡證實(shí)有凋亡細(xì)胞;MDL28170可減少陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量,抑制神經(jīng)元死亡,差異有顯著性(Plt;0.05)。結(jié)論:MDL28170可通過(guò)抑制神經(jīng)凋亡而對(duì)新生大鼠HIBD具有一定保護(hù)作用。Abstract: Objective: To investigate the effect of (Calpain inhibitor3) MDL28170 on neural apoptosis in a neonatal model of hypoxicischemic brain damage (HIBD). Methods: A neonatal model of HIBD was established, 7dayold SD rats were divided into three groups. The treatment group received MDL28170(ip) at 0 h,2 h,4 h after HI, whereas the other two groups were administered normal saline simultaneously. The expression of caspase3 (by immunohistochemistry), neural apoptosis (by TUNEL) in cortex and hippocampus ipsilateral to the insult were observed 24 h after HI; hippocampal CA1 neural loss and electromicroscopic changes were assessed at the same time. Results: Apoptotic body was observed by electromicroscopy. Caspase3 positive cells and apoptotic cells increased significantly in the ipsilateral cortex and hippocampal CA1 region compared to the control, and MDL28170 reduced the number of positive cells, attenuated CA1 neural loss with significance (Plt;0.05). Conclusion: It is suggested that MDL28170 may protect the brain of neonatal rats after HIBD by suppressing neural apoptosis.
【摘要】 目的 研究反義核酸技術(shù)封閉谷氨酰胺酶( GA) 基因?qū)β闶篌w內(nèi)胃癌細(xì)胞凋亡作用的影響。方法 將攜帶GA 反義基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC27901 ,并將成功轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞接種于裸鼠皮下,獲得裸鼠胃癌移植瘤模型,通過(guò)TUNEL 技術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞凋亡的凋亡指數(shù); RT2PCR 技術(shù)檢測(cè)移植瘤細(xì)胞內(nèi)GA mRNA 的含量。結(jié)果 GA 反義基因質(zhì)粒載體成功轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后,腫瘤生長(zhǎng)速度減慢,癌細(xì)胞凋亡增加,腫瘤細(xì)胞內(nèi)GA mRNA的含量減少。結(jié)論 GA 反義基因可抑制GA 基因的表達(dá),明顯促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。
目的 探討烏司他丁(UTI)對(duì)重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠腎臟細(xì)胞凋亡及bcl-2基因表達(dá)的影響。方法 60只大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、SAP組和UTI組，大鼠SAP模型采用5%?；悄懰徕c逆行膽胰管注射法建立。于建模后6 h及14 h時(shí)測(cè)定血Cr及BUN，于光鏡及電鏡下觀察腎組織病理變化，TUNEL法檢測(cè)腎臟細(xì)胞凋亡情況，SABC免疫組化染色法測(cè)定腎臟組織bcl-2基因的蛋白表達(dá)。結(jié)果 SAP組光、電鏡下見(jiàn)腎臟組織損害明顯，血Cr、BUN、腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)和bcl-2表達(dá)均高于假手術(shù)組(P＜0.05，P＜0.01)，且除bcl-2表達(dá)外，均隨病程延長(zhǎng)逐漸升高（P＜0.05）； 經(jīng)UTI治療后，光、電鏡下見(jiàn)腎臟組織損害減輕，血Cr、BUN和腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)較SAP組明顯下降（P＜0.05），而bcl-2表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）。腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)與血BUN和Cr均呈正相關(guān)（r=0.807,P＜0.05; r=0.812,P＜0.05)。結(jié)論 UTI對(duì)腎功能的保護(hù)作用可能部分是通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因bcl-2的表達(dá)從而影響細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。
目的探討p38蛋白激酶（p38 MAPK）在小腸移植早期排斥反應(yīng)中腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡機(jī)理中的作用。方法選用近交系SD和Wistar大鼠進(jìn)行節(jié)段性小腸移植，實(shí)驗(yàn)分3組： 同基因移植組（Wistar→Wistar組）、異基因移植組（SD→Wistar組）和異基因移植加環(huán)孢素A組（SD→Wistar+CsA組）。分別于移植術(shù)后1、3、5及7 d采集移植腸管行病理學(xué)檢查排斥反應(yīng)，TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞，并行Westernblotting測(cè)定p38 MAPK表達(dá)； 同時(shí)，ELISA法測(cè)定血清TNFα活性。結(jié)果SD→Wistar組腸黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生輕、中、重度排斥反應(yīng)中存在細(xì)胞凋亡，凋亡細(xì)胞數(shù)隨排斥反應(yīng)的加重而增加（P＜0.01）； Wistar→Wistar組排斥反應(yīng)輕微，凋亡細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯變化（Pgt;0.05）； SD→Wistar+CsA組隨著CsA的應(yīng)用，排斥反應(yīng)逐漸得到控制，且凋亡細(xì)胞數(shù)也隨著減少。SD→Wistar組及SD→Wistar+CsA組的血清TNFα隨移植腸管上皮細(xì)胞凋亡的輕重而發(fā)生相應(yīng)的變化（P＜0.01）。p38 MAPK在SD→Wistar組隨凋亡細(xì)胞數(shù)增加而表達(dá)加強(qiáng)（P＜0.01），Wistar→Wistar組p38 MAPK表達(dá)無(wú)明顯變化（Pgt;0.05），在SD→Wistar+CsA組隨凋亡細(xì)胞數(shù)而發(fā)生相應(yīng)的變化（P＜0.01）。小腸移植早期排斥反應(yīng)中腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡現(xiàn)象與p38 MAPK呈正相關(guān)（r=0.875，P＜0.01），血清TNFα與移植腸上皮細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)（r=0.837, P＜0.01），血清TNFα與p38 MAPK亦呈正相關(guān)（r=0.826，P＜0.01）。結(jié)論大鼠小腸移植排斥反應(yīng)中存在腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，p38 MAPK參與細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程并起重要作用。
目的探討生長(zhǎng)抑素對(duì)人胃癌細(xì)胞的抑制作用及其作用機(jī)理。方法以生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物奧曲肽作用于人胃癌細(xì)胞株SGC7901細(xì)胞，以人成纖維細(xì)胞株HF作為正常細(xì)胞對(duì)照，以5FU作為陽(yáng)性藥物對(duì)照，通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、熒光顯微鏡觀察及流式細(xì)胞術(shù)分析，得出結(jié)論。結(jié)果一定濃度范圍內(nèi)的奧曲肽對(duì)SGC7901細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，其抑制作用具有量效關(guān)系和飽和性。奧曲肽對(duì)SGC7901細(xì)胞的抑制程度接近于5FU對(duì)他的抑制，而對(duì)HF細(xì)胞無(wú)影響。奧曲肽可誘導(dǎo)SGC7901細(xì)胞凋亡。結(jié)論奧曲肽在體外對(duì)SGC7901細(xì)胞具有抑制作用，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡可能是其作用機(jī)理之一。
目的通過(guò)檢測(cè)腫瘤壞死因子相關(guān)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)配體受體-4（TRAIL-R4）在胰腺癌組織中的表達(dá)，探討胰腺癌細(xì)胞抵抗細(xì)胞凋亡的機(jī)理。方法應(yīng)用mRNA印跡法（Northern blotting）、蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）和免疫組織化學(xué)技術(shù)，定性、定位分析TRAIL-R4在正常胰腺組織和胰腺癌組織中的表達(dá)。結(jié)果TRAIL-R4 mRNA和蛋白在正常胰腺組織中呈弱表達(dá)或不表達(dá)，而在胰腺癌組織中呈高表達(dá)； 免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示，在胰腺癌細(xì)胞中TRAIL-R4蛋白呈強(qiáng)染色。結(jié)論TRAIL-R4表達(dá)水平在正常胰腺組織與胰腺癌組織中存在顯著差異，提示胰腺癌細(xì)胞中可能存在對(duì)TRAIL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡抵抗新機(jī)理。
目的研究不同類(lèi)型（囊狀、梭狀型）先天性膽總管囊腫壁細(xì)胞凋亡與增殖的關(guān)系，了解細(xì)胞凋亡/增殖在膽總管囊腫中的作用。方法以膽總管囊狀擴(kuò)張組32例、梭狀擴(kuò)張組35例及膽總管結(jié)石致膽管擴(kuò)張組（對(duì)照組）25例為研究對(duì)象。術(shù)中取部分膽總管壁送檢,觀察膽總管壁損傷情況。用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的相關(guān)指標(biāo)bcl2、bax及細(xì)胞增殖指標(biāo)PCNA的表達(dá)； 用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果囊狀擴(kuò)張組膽總管壁粘膜上皮細(xì)胞破壞嚴(yán)重，梭狀擴(kuò)張組鏡下所見(jiàn)與囊狀擴(kuò)張組相似，但程度較輕。對(duì)照組膽總管粘膜上皮細(xì)胞破壞最輕，其凋亡細(xì)胞呈散在分布，上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞凋亡陽(yáng)性率較低，分別為（2.74±1.00）%和（2.95±0.87）%； bcl2、bax表達(dá)率較低，水平相似（Pgt;0.05）； PCNA表達(dá)率較高，分別為（3.74±1.00）%和（3.71±1.77）%。囊狀擴(kuò)張組與梭狀擴(kuò)張組囊壁殘留上皮中的bcl2和PCNA表達(dá)率低，分別為（0.99±0.51）%和（0.90±0.38）%； bax呈高表達(dá)，bcl2呈低表達(dá)，凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率較高，分別為（13.94±4.77）%和（7.51±3.46）%； 成纖維細(xì)胞中的PCNA表達(dá)率較高，分別為（9.91±2.91）%和（9.70±3.18）%，bax呈低表達(dá)，bcl2呈高表達(dá)，凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率較低，分別為（3.74±2.12）%和（4.46±2.41）%。兩組之間上述各項(xiàng)指標(biāo)比較無(wú)明顯差異（Pgt;0.05），但兩組的bcl2和bax的表達(dá)與對(duì)照組比較則明顯升高(P＜0.05)。結(jié)論細(xì)胞凋亡在膽總管囊腫形成中有一定的促進(jìn)作用。
目的研究肝臟低溫保存再灌注期間肝細(xì)胞糖原含量與肝細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系及bax基因在其中的作用。方法制備糖原含量顯著不同的4組兔肝臟模型，根據(jù)給食方法的不同分為A組（禁食24 h，但自由飲水）、B組（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食）、C組（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食＋每6 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml）及D組（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食＋每4 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml），檢測(cè)各組肝臟低溫保存再灌注期間肝細(xì)胞凋亡及bax基因蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果各組肝臟于低溫保存9 h后再灌注60 min時(shí),肝組織內(nèi)可見(jiàn)明顯的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，A、B、C、D 4組的凋亡細(xì)胞數(shù)量依次減少, 4組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組肝細(xì)胞bax基因蛋白的表達(dá)程度與肝細(xì)胞糖原含量有密切的相關(guān)性。 結(jié)論肝臟低溫保存再灌注過(guò)程中,肝細(xì)胞內(nèi)糖原能明顯拮抗肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，其內(nèi)在機(jī)理可能為肝細(xì)胞糖原通過(guò)抑制bax基因蛋白的表達(dá)從而達(dá)到拮抗肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
目的 探討槐耳清膏在體外對(duì)人直腸癌HR8348細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用及其作用機(jī)理。方法 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HR8348細(xì)胞用含槐耳清膏的培養(yǎng)基培養(yǎng)36 h，用四氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)吸光度(OD)值，計(jì)算抑制率； 用甲基綠-派若寧染色法及TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù)； 用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)bcl-2、bcl-xl、bax、bak及p53基因表達(dá)的情況。結(jié)果 槐耳清膏對(duì)HR8348細(xì)胞的抑制率隨濃度增加而上升，濃度為4.0 mg/ml時(shí)抑制率最大（71.1%），與5-FU組（濃度為10 μg/ml）相比差異無(wú)顯著性意義（P＞0.05）。甲基綠-派若寧染色法和TUNEL法均可見(jiàn)到典型的細(xì)胞凋亡、凋亡小體或出泡現(xiàn)象，凋亡指數(shù)隨槐耳清膏濃度的增加而增加，當(dāng)濃度達(dá)4.0 mg/ml時(shí)，凋亡指數(shù)迅速上升，甲基綠-派若寧法為0.1620±0.0128，TUNEL法為0.2612±0.0158，均大于5-FU組的凋亡指數(shù)（0.0780±0.0095和0.1028±0.0131），P＜0.05?；倍甯嘟Mbcl2、bclxl、bak、p53蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組明顯增強(qiáng)（P＜0.05)，而bax變化不明顯（P＞0.05）?；倍甯嘟Mbak/bcl-2 和bak/bcl-xl比值顯著大于空白對(duì)照組。結(jié)論 槐耳清膏在體外對(duì)人直腸癌HR8348細(xì)胞具有顯著的抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用?；倍甯嗾T導(dǎo)人直腸癌HR8348細(xì)胞凋亡可能與提高bak/bcl-2、bak/bcl-xl比值及上調(diào)p53基因表達(dá)有關(guān)。